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1045次微載體是目前*的zui有發展前途的一種動物細胞大規模培養技術,其兼具懸浮培養和貼壁培養的優點,放大容易。目前微載體培養廣泛用于培養各種類型細胞,蛋白質產品,如293細胞,成肌細胞,Ve r o細胞,CHO細胞。常用商品化微載體有三種:Cytodex ,Cytopore和Cytoline。 使用較多的反應器有兩種:貝朗公司的BIOSTAT B反應器,使用雙槳葉無氣泡通氣攪拌系統;NBS公司的CelliGen,CelliGen PlusTM和Bioflo3000反應器,使用Cell-lift雙篩網攪拌系統。兩種系統都能實現培養細胞和收獲產物的有效分離。 微載體培養293細胞,首先要選擇合適的微載體類型和攪拌速度。接種細胞可用1L spinner微載體培養系統或是其它貼壁培養方式準備,采用灌流培養,培養周期10-15天,能達到的細胞密度為5-10×106/ml。
無血清懸浮培養 無血清懸浮培養是用已知人源或動物來源的蛋白或激素代替動物血清的一種細胞培養方式,它能減少后期純化工作,提高產品質量,正逐漸成為動物細胞大規模培養的研究新方向。要實現293細胞無血清懸浮培養必須先將貼壁培養293改造為懸浮培養293S細胞并尋找適合高密度無血清培養的培養液配方。 懸浮培養時,由于缺少血清和蛋白的保護作用,293S對剪切力的敏感度增加,難以達到高密度培養,導致293S產生病毒的數量比貼壁培養低5-10倍左右。細胞接種后,灌流培養7天,達到細胞密度5×106/ml,增殖5-10倍。
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