狼源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒產品特點:
1. 使用化學修飾的熱啟動聚合酶,反應特異性高,*程度地避免了非特異擴增;
2. 反應緩沖液經充分優化,反應靈敏快速,40個循環只需20多分鐘;
3. 抗干擾能力強,反應重復性高,適合對土壤、糞便、腫瘤和血液來源的復雜樣本中的靶基因進行檢測分析。
在PCR反應體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監測整個PCR進程,zui后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。
特異性熒光標記:
TaqMan法
TaqMan探針的特性:
(1)5′端標記有報告基團(Reporter, R),如FAM、VIC等
(2)3′端標記有熒光淬滅基團 (Quencher, Q)
(3)探針完整,R所發射的熒光能量被Q基團吸收 ,無熒光, R與Q分開,發熒光
(4)Taq酶有 5′→3′外切核酸酶活性,可水解探針
相對定量通過內標定量:
內標(Endogenous Control)通常是β-actin、GAPDH基因等看家基因,在細胞中的表達量或在基因組中的拷貝數恒定,受環境因素影響小,內標定量結果代表了樣本中所含細胞或基因組數量。
A549, 人肺癌細胞系
SKOV3/Taxol-25, 人卵巢癌紫杉醇耐藥細胞株
A-375 [A375], 人惡性黑素瘤細胞株
A549/DDP, 人肺腺癌耐藥細胞株
SP2/0, 小鼠骨髓瘤細胞
WM35, 人黑色素瘤細胞
BxPC-3, 人原位胰腺腺癌細胞株
U-2 OS, 人骨肉瘤細胞
WM451, 人黑色素瘤細胞
SW 1990 [SW-1990, SW1990] , 人胰腺癌細胞
C6, 大鼠腦膠質瘤細胞
UM-UC-3, 人膀胱移行細胞癌
Hela, 人宮頸癌細胞系
HNE2, 人鼻咽癌細胞系
SKOV3 [SK-OV-3], 人卵巢癌腺癌細胞系
786-O [786-0], 人腎透明腺癌細胞
HEC-1A, 人子宮內膜癌細胞系
Caki-1, 人腎透明細胞癌皮膚轉移細胞
Ishikawa, 人子宮內膜癌細胞系
ACHN, 人腎細胞腺癌細胞
JEC, 人子宮內膜腺癌細胞系
BPH-1, 人前列腺增生細胞
RL95-2, 人子宮內膜腺癌細胞系
Ca Ski, 人宮頸癌細胞
MCF-7 [MCF7], 人乳腺癌細胞系
Raw264.7, 小鼠單核巨噬細胞白血病細胞
GBC-SD, 人膽囊癌細胞
5637, 人膀胱癌細胞
CNE1, 人鼻咽癌細胞系
HT-29, 人結腸癌細胞
T24, 人膀胱癌細胞
5-8F, 人高轉移鼻咽癌細胞系
HCT116, 人結直腸癌細胞
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