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葡聚糖凝膠G-25的操作步驟

時間:2019/7/17閱讀:2503
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葡聚糖凝膠G-25說明:
葡聚糖凝膠G-25(Sephadex G-25),吸水率是2.5mL/g干膠,葡聚糖凝膠是一種珠狀的凝膠,含有大量的羥基,很容易在水中和電解質溶液中溶脹;G型的葡聚糖凝膠有各種不同的交聯度,因此它們的溶脹度和分級分離范圍也有所不同;葡聚糖凝膠的溶脹度基本上不因鹽和洗滌劑的存在而受影響。

葡聚糖凝膠G-25操作步驟:
1、毫升蒸餾水,攪拌均勻,在室溫溶脹6小時,或沸水浴溶脹2小時,一般采用后一種方法;再用傾瀉法除去凝膠上層水及細小顆粒,用蒸餾水反復洗滌幾次,再以緩沖溶液(pH7.0的Tris—醋酸溶液)洗滌2—3次,使pH和離子強度達到平衡,zui后抽去溶液及凝膠顆粒內部氣泡,凝膠可保存在緩沖液內。

2.裝柱:將層析柱洗凈,垂直固定在鐵支架上,選擇有薄膜端作為層析柱下口,將下口凝膠表面平齊時,關閉下端出口。

3、用少量洗脫液清洗層析柱加樣區,共洗滌三次,每次清洗液應*進入凝膠柱內后,再進行下一次洗滌;zui后在凝膠表面上加入洗脫液,保持高度為3—4cm。

4、洗脫與收集:連接好凝膠柱層析系統,調節洗脫液流速為每分鐘1毫升,進行洗脫;仔細觀察樣品在層析柱內的分離現象,收集洗脫液,每收集3毫升即換一支收集管(試管預先編號),收集約20管左右,樣品即可*被洗脫下來;將各收集管中的洗脫液分別用721型分光光度計在波長540nm處測定其光密度。

5、凝膠回收處理方法:將樣品*洗脫下來后,繼續用三倍柱床體積的洗脫液沖洗凝膠后,將柱下口放在小燒杯中,慢慢打開,再將上口慢慢松開,使凝膠全部回收至小燒杯中,備用。

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