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在ELISA試劑盒批發(fā)實驗中加樣一般有3次，即加標本，加酶結(jié)合物，加底物。加樣時應將所加物加在ELISA檢測試劑盒板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可濺出，不可產(chǎn)生氣泡。加標本一般用微量加樣器，按規(guī)定的量加入板孔中。每次加標本應更換吸嘴，以免發(fā)生交叉污染，也可用一次性的定量塑料管加樣。有此測定(如間接法ELISA)需用稀釋的血清，可在試管中按規(guī)定的稀釋度稀釋后再加樣。
也可在板孔中加入稀釋液，再在其中加入血清標本，然后在微型震蕩器上震蕩1分鐘以保證混和。加酶結(jié)合物應用液和底物應用液時可用定量多道加液器，使加液過程迅速完成。
洗滌在ELISA檢測試劑盒過程中雖不是一個反應步驟，但卻也決定著實驗的成敗。ELISA檢測試劑盒就是靠洗滌來達到分離游離的和結(jié)合的酶標記物的目的。通過洗滌以清除殘留在板孔中沒能與固相抗原或抗體結(jié)合的物質(zhì)，以及在反應過程中非特異性地吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。聚苯乙烯等塑料對蛋白質(zhì)的吸附是普遍性的，而在洗滌時又應把這種非特異性吸附的干擾物質(zhì)洗滌下來。可以說在ELISA檢測試劑盒操作中，洗滌是*主要的關(guān)鍵技術(shù)，應引起操作者的高度重視，操作者應嚴格按要求洗滌，不得馬虎。
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