原代細胞核的分離提取

時間：2017/4/11閱讀：815

(一)原代細胞操作步驟

1．用頸椎脫位的方法處死小白鼠后，迅速剖開腹部取出肝臟，剪成小塊(去除結締組織)盡快置于盛有0.9％NaCl的燒杯中，反復洗滌，盡量除去血污，用濾紙吸去表面的液體。

2．將濕重約1g的肝組織放在小平皿中，用量筒量取8ml預冷的0.25mol／L蔗糖一0.003mol／L氯化鈣溶液，先加少量該溶液于平皿中，盡量剪碎肝組織后，再全部加入。

3．剪碎的肝組織倒入勻漿管中，使勻漿器下端浸入盛有冰塊的器皿中，左手持之，右手將勻漿搗桿垂直插入管中，上下轉動研磨3～5次，用3層紗布過濾勻漿液于離心管中，然后制備一張涂片①，做好標記，自然干燥。

4．原代細胞將裝有濾液的離心管配平后，放入普通離心機，以2500rpm，離心15分鐘；(1)緩緩取上清液，移入高速離心管中，保存于有冰塊的燒杯中，待分離線粒體用；(2)同時涂一張上清液片②做好標記，自然干燥；(3)余下的沉淀物進行下一步驟。

5．用6ml0.25mol/L蔗糖一0.003mol／L氯化鈣溶液懸浮沉淀物，以2500rpm離心15分鐘棄上清，將殘留液體用吸管吹打成懸液，滴一滴于干凈的載玻片上，涂片③，自然干燥。

6．將①、②、③涂片用l％甲苯胺蘭染色后蓋片即可觀察。

(二)原代細胞結果分別于高倍鏡下觀察三張涂片，描述鏡下所見。

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