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原代細胞取材的基本要求和注意事項

時間:2017/1/3閱讀:3738
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原代細胞取材的基本要求和注意事項

人和動物細胞的取材是原代細胞培養成功的首要條件,是進行細胞培養的*步,若取材不當,將會直接影響細胞的體外培養,現將取材的基本要求和注意事項敘述如下:

一、取材的基本要求

 ?。?)取材要注意新鮮和保鮮 新鮮組織易于培養成功,取材時應盡量在4~6h內能制作成細胞,盡快入箱培養,若不能即時培養,應將組織浸泡于培養液內,于4℃存放。若組織塊較大,應在清除表面血、壞死組織、脂肪和結締組織后,切碎于培養液內4℃存放,但時間不能超過24h。對于已切碎的組織或血液、淋巴組織應加入含10%二甲基亞砜的培養基,按細胞凍存方式于液氮中冷凍保存。

  (2)取材應嚴格無菌 所取標本材料應在無菌條件下進行,為了確保無菌,對所取材料若疑有污染的可能,應將所取組織在含高濃度抗菌素(400單位/mL)甚至加入適量的兩性霉素B或10%達克寧液的培養液內于4℃下存放2小時以上,再用PBS洗2~3次,以確保所取材料無菌。要用無菌包裝的器皿或事先消毒好的帶少許培養液(內含400單位/mL抗菌素)的小瓶等便于攜帶的物品來取材,所取材料應避免接觸有毒有害的化學物質,如碘、汞等。

 ?。?)取材和原代細胞制作時,要用鋒利的器械,如手術刀或剃須刀片切碎組織,盡可能減少對細胞的機械損傷。  
 

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