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ATCC細胞獲得無限表達所需是試劑

時間:2018/3/6閱讀:220
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(1)ATCC細胞瞬時表達:通常可以使蛋白在細胞中暫時表達數天到數周。瞬時表達常用于驗證cDNA是否能夠指導蛋白的合成,比較表達同一蛋白的不同載體的有效性,在進行建立穩定轉染的細胞系之前,通過瞬時表達來驗證重組表達載體的正確性是十分必要的。然而,瞬時表達難以按比例產生大量蛋白質(>1mg),此外,整個細胞群體中只有部分細胞暫時得到蛋白表達,不利于細胞表型的研究。

(2)穩定表達:通過利用共轉染的標記篩選系統,如G418等,對DNA轉染后的哺乳動物細胞進行選擇,使質粒DNA穩定整合到宿主細胞染色體上,則可以獲得無限表達所需蛋白的穩定轉染細胞系。

(3)誘導表達:可誘導表達系統使外源基因的表達受誘導刺激強度控制,避免持續穩定表達某些蛋白帶來的細胞毒性,zui常用的是四環素(tetracyrcline,tet)調控的可誘導表達系統,具有嚴密、、可控制性強的優點。該系統由調節質粒和反應質粒組成,有兩種調節方式:①tet-off,四環素存在時外源基因表達受抑制,而去除四環素后誘導基因表達;②tet-on則相反,培養基中有四環素時表達外源基因,無四環素時基因表達受抑制。tet-on系統更容易操作,避免誘導蛋白時清洗四環素的步驟,由于普通血清含有四環素而容易誘導不必要的蛋白表達,因此tet-on細胞需要在無四環素的血清中培養。

除了質粒表達載體以外,病毒介導的基因轉移也是將外源DNA引入不同類型細胞的有效而方便的方法,痘苗病毒是常用系統之一。痘苗病毒載體中必須表達cDNA而不是基因組克隆,病毒在感染后6小時開始形成,一直持續2天。痘苗病毒表達系統能表達多個蛋白或表達多亞基酶的幾個亞基,例如,ATCC細胞含有不同cDNA的DTM-1載體可以共轉染到表達噬菌體T7聚合酶的細胞中以研究多種蛋白的表達,對研究多亞基蛋白復合物的組織尤其有用。
對照品    磺胺嘧啶    100mg    對照品
對照品    炔諾孕酮    100mg    對照品
對照品    甲萘醌    50mg    對照品
對照品    甲巰咪唑    100mg    對照品
對照品    甲氧芐啶    100mg    對照品
對照品    己酸羥孕酮    50mg    對照品
對照品    己烯雌酚    50mg    對照品
ATCC細胞

 

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