在解凍凍存干細(xì)胞時(shí)，發(fā)現(xiàn)會(huì)出現(xiàn)存活率低、大量細(xì)胞碎片及生長緩慢等問題， 是什么原因?qū)е拢撛趺催M(jìn)行解決？現(xiàn)在我們大家一起往下看吧。或許能給您的實(shí)驗(yàn)問題的解決找到答案！
低存活率
出現(xiàn)低存活率的可能原因及推薦解決方案如下：
1.解凍過程中細(xì)胞裂解
推薦的解決方案：可預(yù)期到一定量的細(xì)胞死亡，因此細(xì)胞的濃度應(yīng)足夠高，考慮到這一損失。起始濃度為106至107細(xì)胞/毫升。
2.解凍過程中的問題
推薦的解決方案：在-70℃至-80℃下保存冷凍的培養(yǎng)物，保存時(shí)間為1-5天，但這不是保存的方法。在37℃充分解凍后應(yīng)立即開始培養(yǎng)。
3.對(duì)冷凍液過敏
推薦的解決方案：A.*或部分更換培養(yǎng)基，減少培養(yǎng)基中冷凍液的量。在24小時(shí)后更換培養(yǎng)液體可全部去除冷凍液。
B.留出更多時(shí)間供培養(yǎng)物恢復(fù)。有時(shí)細(xì)胞需要幾周時(shí)間才能形成單層或密集的懸浮物，取決于冷凍時(shí)細(xì)胞的年齡或傳代次數(shù)或在生長階段中的位置。冷凍的*條件在對(duì)數(shù)期。
4.被冷凍的原種細(xì)胞的年齡或冷凍時(shí)培養(yǎng)物的年齡
推薦的解決方案：解凍zui近冷凍的細(xì)胞。細(xì)胞處于冷凍狀態(tài)的時(shí)間越長，存活率越低。檢查冷凍細(xì)胞的時(shí)間和方法。在冷凍時(shí)細(xì)胞應(yīng)處于對(duì)數(shù)期。
大量細(xì)胞碎片
出現(xiàn)大量細(xì)胞碎片的可能原因及推薦解決方案如下：
1.冷凍時(shí)細(xì)胞密度過低
推薦的解決方案：縮短解凍過程中的時(shí)間。將細(xì)胞取出后，立即將凍存管浸入在37℃的水浴中，并震蕩至全部融化，然后迅速地轉(zhuǎn)移到預(yù)熱的培養(yǎng)基中。
2.不適當(dāng)?shù)睦鋬鲞^程
推薦的解決方案：解凍不同冷凍室總的試管。確保在凍存過程中采用的適當(dāng)?shù)募夹g(shù)，并確保使用了適量和適合的冷凍液。
生長緩慢
出現(xiàn)生長緩慢的可能原因及推薦解決方案如下：
1.培養(yǎng)瓶的大小
推薦的解決方案：一些細(xì)胞在培養(yǎng)基中傾向于維持一定的密度。將培養(yǎng)物轉(zhuǎn)移到較小的培養(yǎng)瓶中，使干細(xì)胞密度上升；如，根據(jù)培養(yǎng)基的體積，從75cm2的燒瓶轉(zhuǎn)移到2或3個(gè)25cm2的燒瓶中。
2.細(xì)胞密度過低
推薦的解決方案：提高未來冷凍物種細(xì)胞的凍存密度，或使用較小的培養(yǎng)容器，或解凍多個(gè)試管來進(jìn)行培養(yǎng)。
BR    Casein Hydrolysate    250克    酶水解酪蛋白
        1公斤    
BR，90%    Soy protein isolate    250克    豆蛋白質(zhì)
BR    Lactalbumin hydrolysate    250克    水解乳蛋白
        1公斤    
診斷試劑用    Calf serum    200毫升    小牛血清
BR    Fetal bovine serum(Characterized FBS)    200毫升    標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清
BR    Fetal bovine serum(Characterized FBS)    100毫升    優(yōu)級(jí)胎牛血清
        500毫升    
BR    Fetal bovine serum(Defined FBS)     100毫升    特級(jí)胎牛血清
干細(xì)胞