一、腫瘤細(xì)胞實驗?zāi)康?/p>

能獨立地進(jìn)行用于細(xì)胞培養(yǎng)的各種器皿的清洗與消毒，掌握干熱滅菌法、濕熱滅菌法和濾過除菌法的操作，了解化學(xué)消毒法的使用方法。

二、實驗原理

清洗與消毒是組織培養(yǎng)實驗的*步，是組織培養(yǎng)中工作量zui大，也是zui基本的步驟。體外培養(yǎng)細(xì)胞所使用的各種玻璃或塑料器皿對清潔和無菌的要求程度很高。細(xì)胞養(yǎng)不好與清洗不*有很大關(guān)系。清洗后的玻璃器皿，不僅要求干凈透明，無油跡，而且不能殘留任何物質(zhì)。如有毒的化學(xué)物質(zhì)，哪怕殘留0.1個，也可能影響細(xì)胞生長。滅菌手段的選擇十分重要，對不同的物品需采用不同的滅菌方法。假如選用的方法不對，即使達(dá)到了無菌卻使被滅菌藥品喪失了營養(yǎng)價值、生物學(xué)特性或其他使用價值也不行。以下在每種滅菌步驟中都介紹其使用范圍。

三、實驗材料、用品

1、材料：無臭氧型紫外燈，微孔濾膜(直徑25)：孔徑為0.22μm，微孔濾膜(直徑90)：孔徑為0.22 μm，過濾器(直徑25)。

2、藥品：70%或75%酒精，0.1%新潔爾滅，煤酚皂溶液(來蘇兒水)，0.5%過氧乙酸，乳酸，37%甲醛，高錳酸鉀，NaOH，鹽酸，重鉻酸鉀，濃硫酸(工業(yè))，DEPC水[體積分?jǐn)?shù)0.1%的焦炭酸二乙酯(diethylpyroearbonate)]。

3、儀器：超凈臺，干燥箱，高壓鍋，過濾器，過濾泵。

四、實驗步驟

(一)實驗器具清洗

l 玻璃類 1、主要有：培養(yǎng)瓶，血清瓶，小青瓶，移液管，離心管，試管，培養(yǎng)皿等。

2、清洗步驟：

泡在含有洗潔凈的自來水中→撈出來用毛刷將實驗器具各個面刷洗至少25遍→自來水沖洗25遍→過一遍一蒸水→泡入鉻酸,過夜(24h左右)→從鉻酸中撈出器具，自來水沖洗25遍→過三遍一蒸水，三遍三蒸水→烘箱內(nèi)烘干→收入柜子備用→用前高溫滅菌(121℃，25min)→烘干→使用。

注意：新的玻璃器具先要泡鹽酸1天，然后清洗步驟與上面相同。

l 塑料類

1 塑料類器具主要包括：孔板，大槍頭，瓶蓋，濾器，采血管等。

2 清洗步驟：

(1)孔板，采血管

泡在有洗潔凈的自來水中→用超聲清洗儀超聲3遍(每遍1小時，200C)→在含有洗潔凈的自來水中用毛刷或者紗布將各個面刷洗至少25遍→過一遍一蒸水→泡入鹽酸過一個禮拜→從鹽酸中撈出后自來水沖洗25遍→過三遍一蒸水(每遍3次)，三遍三蒸水→烘箱內(nèi)烘干→收入柜子→用前包裝好照鈷→使用

(2)大槍頭，蓋子，濾器

腫瘤細(xì)胞在含有洗潔凈的自來水中用毛刷或者紗布將各個面刷洗至少25遍→用超聲清洗儀超聲1遍(每遍45分鐘，200C)→自來水沖洗→過三遍一蒸水(每遍3次)，三遍三蒸水→烘箱內(nèi)烘干→收入柜子→用前包裝好滅菌→使用

注意：(1)烘孔板時溫度不應(yīng)太高，烘干后用報紙包裹，裝入箱子內(nèi)，照鈷，便可使用。

(2) 新的培養(yǎng)瓶蓋子泡舊5%稀鹽酸1天→再用2%NaOH煮20min →自來水沖洗→洗潔精清洗→用超聲清洗儀超聲1遍(每遍45分鐘，200C)→沖洗15遍→過三遍一蒸(每遍3次)→過三遍三蒸水→烘干使用
1,2,4,5-環(huán)己烷四甲酸二酐(>98.0%(T))    英文名稱：    1,2,4,5-Cyclohexanetetracarboxylic Dianhydride    質(zhì)量規(guī)格：    >98.0%(T)            CAS號：    2754-41-8    
1,2,4,5-四甲基苯(NMR定量標(biāo)準(zhǔn)品,99.8%(GC))    英文名稱：    1,2,4,5-Tetramethylbenzene    質(zhì)量規(guī)格：    NMR定量標(biāo)準(zhǔn)品,99.8%(GC)            CAS號：    95-93-2    
1,2,4,5-四氯苯(標(biāo)準(zhǔn)品)    英文名稱：    1,2,4,5-Tetrachlorobenzene    質(zhì)量規(guī)格：    分析標(biāo)準(zhǔn)品            CAS號：    95-94-3    
1,2,4,5-四氯苯標(biāo)準(zhǔn)溶液(0.104mg/ml,基體:異辛烷)    英文名稱：    1,2,4,5-Tetrachlorobenzene solution    質(zhì)量規(guī)格：    0.104mg/ml,基體:異辛烷            CAS號：    95-94-3    
腫瘤細(xì)胞