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神經細胞培養需要注意的操作方法

時間:2017/2/21閱讀:891
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神經細胞培養需要注意的操作方法

神經細胞(神經元)不易培養,只有在適宜情況下,如接種在膠原底層上,或加入神經生長因子和膠質干細胞因子時,可出現一定程度的分化,長出突起等現象,但很難使之增值。而神經膠質細胞是神經組織中比較容易培養的成分。 

人、鼠等腦組織即可用于神經膠質細胞培養,不僅能獲得生長的膠質細胞,也可形成能傳代的二倍體細胞系。一般說來,膠質細胞在培養中生長不穩定,不易自發轉化,但對外界因素仍保持很好的敏感性,可用ROUS病毒和SV4等誘發轉化。 
1、從手術室無菌取腦髓灰質或白質后,仔細剝除腦膜、血管和纖維成分,置hanks液中漂洗一、二次。 
2、置于30—50倍體積的hanks液中,此時腦組織比較柔軟,反復吹打即制成干細胞懸液。 
3、把懸液注入離心管室溫中直立5—10分鐘后,細胞或細胞團快自然下沉,脂肪等雜物易漂浮,可吸除上層、反復二、三次,即可排除脂肪成分和其它碎塊并獲較多細胞成分。 
4、在沉降物中加入適量培養液,通過紗網成紗布過濾,計數并調整細胞密度。 
5、接入培養瓶或皿中,置5%CO2溫箱中培養。 
該細胞適應環境過程較長,接種后貼壁較慢。貼壁后短期內也可能不見細胞分裂現象,然而一旦生長后即能迅速進入旺盛的增殖狀態。干細胞傳代可以0.25%胰酶消化處理。

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