培養(yǎng)基

       基礎(chǔ)培養(yǎng)基絕大多數(shù)是建立在平衡鹽溶液（BSS）基礎(chǔ)上，添加了氨基酸、維生素和其它與血清中濃度相似的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。zui廣泛應(yīng)用的基礎(chǔ)培養(yǎng)基是MEM ，其中含有13種必須氨基酸、8種維生素。

    目前科研市場(chǎng)經(jīng)典的培養(yǎng)基有很多種，其中DMEM、RPMI 1640、MEM、DMEM/F12都是應(yīng)用zui廣泛的培養(yǎng)基。其他如M199、IMDM、L15培養(yǎng)基等也用于ATCC細(xì)胞的培養(yǎng)。

1. MEM是由基礎(chǔ)培養(yǎng)基(BME)發(fā)展而來(lái)的，其中增加了組分的范圍及濃度。

2. 改良的基礎(chǔ)培養(yǎng)基培養(yǎng)基也就是我們所說(shuō)的DMEM培養(yǎng)基zui初是為小鼠成纖維細(xì)胞培養(yǎng)專門設(shè)計(jì)的，現(xiàn)在常用于貼壁細(xì)胞的培養(yǎng)。DMEM的氨基酸濃度是MEM的兩倍，維生素濃度是MEM的4倍，采用雙倍的HCO3-和CO2濃度起到更好的緩沖作用。zui初的配方中葡萄糖含量為1000 mg/L，后來(lái)為了某些細(xì)胞的生長(zhǎng)需要，將葡萄糖含量又調(diào)整為4500 mg/L，這就是大家常說(shuō)的低糖和高糖了。

3. a-MEM含有附加的氨基酸、維生素以及核苷和脂肪酸，它可廣泛應(yīng)用于各種細(xì)胞類型，包括對(duì)營(yíng)養(yǎng)成分要求苛刻的細(xì)胞。

4. Ham’s F12是為在低血清濃度下克隆CHO細(xì)胞而設(shè)計(jì)的，現(xiàn)在也廣泛應(yīng)用于克隆形成率的分析及原代培養(yǎng)。F12還可以與DMEM 等體積混合使用，得到一種高濃度與成分多樣化相結(jié)合的產(chǎn)物，這種培養(yǎng)基已應(yīng)用于許多原代培養(yǎng)及更難養(yǎng)的細(xì)胞系的培養(yǎng)。

5. RPMI 1640培養(yǎng)基是專為淋巴細(xì)胞培養(yǎng)而設(shè)計(jì)的，現(xiàn)在已廣泛應(yīng)用于懸浮細(xì)胞的培養(yǎng)。

    很多新人經(jīng)常困惑ATCC細(xì)胞該用哪一種培養(yǎng)基呢?其實(shí)這個(gè)問(wèn)題的答案可以很簡(jiǎn)單，也可以好復(fù)雜。如果這種細(xì)胞是購(gòu)自細(xì)胞庫(kù)，那您直接問(wèn)供應(yīng)商就行了，他們會(huì)給您一個(gè)的推薦。如您不知道細(xì)胞的來(lái)源，您也可以找到相關(guān)的文獻(xiàn)，基本文獻(xiàn)中使用的培養(yǎng)基都可作為參考。但如果你是著手建立一種全新細(xì)胞的培養(yǎng)體系，根本找不到任何參考，那你就得花點(diǎn)時(shí)間自己試驗(yàn)。在MEM中培養(yǎng)的細(xì)胞，很可能在DMEM或M199中同樣很容易生長(zhǎng)。總之，MEM做貼壁細(xì)胞培養(yǎng)、RPMI 1640做懸浮細(xì)胞培養(yǎng)會(huì)是一個(gè)好的開(kāi)始。同時(shí)選購(gòu)幾種不同的培養(yǎng)基同時(shí)進(jìn)行培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)來(lái)選擇其中的。有時(shí)候你會(huì)驚訝地發(fā)現(xiàn)你的*培養(yǎng)條件與文獻(xiàn)報(bào)道的不同，就算是同一種培養(yǎng)條件，細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)也時(shí)好時(shí)壞，這是很正常的。因?yàn)樵噭⑺⒉煌?hào)的血清之間都存在著差異。要提高培養(yǎng)基的穩(wěn)定性，可以從培養(yǎng)基和血清兩方面入手。

    以前大部分實(shí)驗(yàn)室都是用干粉培養(yǎng)基，但干粉有很多弊端

    1. 配制過(guò)程就較為繁瑣，要溶解、調(diào)pH值，過(guò)濾，過(guò)程中可能會(huì)產(chǎn)生一些濃度誤差，

    2.有些實(shí)驗(yàn)室的水質(zhì)并不理想，所以培養(yǎng)的效果會(huì)有差異。

    如果使用液體培養(yǎng)基，這種人為的誤差會(huì)減少，因?yàn)楫吘故谴笈抗I(yè)化的，批間差會(huì)很小。

    血清

    說(shuō)到細(xì)胞培養(yǎng)，血清固然是細(xì)胞培養(yǎng)中*的成分，但血清的批間差異大，更換血清時(shí)需要做大量的測(cè)試以取保替換的血清與原來(lái)的相似。而血清的供應(yīng)也是必須要考慮的因素。由于氣候或瘋牛病等的影響，血清貨源的問(wèn)題對(duì)實(shí)驗(yàn)的影響可非同小可。另外，血清的價(jià)格也很昂貴，高品質(zhì)的澳洲血清價(jià)格更高。因此，也有一些實(shí)驗(yàn)室開(kāi)始換用無(wú)血清培養(yǎng)基。

    無(wú)血清培養(yǎng)基(Serum-Free Media)，

    通常以SFM表示，顧名思義，就是在ATCC細(xì)胞培養(yǎng)中不需要添加血清，但是在某些應(yīng)用中可能要添加生長(zhǎng)因子或細(xì)胞因子。無(wú)血清培養(yǎng)基中添加了血清的主要成分：粘附因子、生長(zhǎng)因子、必需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和激素等，能減少上述血清帶來(lái)的不利因素，使細(xì)胞培養(yǎng)的條件更穩(wěn)定。但它也不是的，從有血清培養(yǎng)過(guò)渡到無(wú)血清培養(yǎng)的條件并不像想象中那么直截了當(dāng)。處于發(fā)育的不同分化階段的細(xì)胞(例如干細(xì)胞與定向前體細(xì)胞相比)需要不同的配方，對(duì)生長(zhǎng)因子和細(xì)胞因子的選擇尤為重要。而且在去除血清的同時(shí)，也去除了一些血清蛋白具有的保護(hù)、解毒作用，因此對(duì)試劑、水的純度和儀器清潔度的要求更高。另外，它的價(jià)格也比普通的培養(yǎng)基貴很多。