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技術文章

尺寸排阻色譜柱的清洗流程

閱讀:3654          發布時間:2018-3-22

    尺寸排阻色譜柱包括分子量測定范圍不同的5種規格的色譜柱,可以將適合樣品分子量和分子量分布的不同級別的色譜柱串聯起來進行分析。尺寸排阻色譜柱通過優化填料的粒徑和細孔容積,實現了色譜柱性能的提升,和色譜柱操作壓強的降低。特別是對單克隆抗體三聚體/二聚體/單體的分離性能有很大的提高,對單體/片段也有很好的分離效果。

  尺寸排阻色譜柱為了方便根據待測成分的分子量來選擇合適的色譜柱,按照凝膠表面孔的大小分成了很多種類。各種色譜柱的排阻界限分子量在產品目錄上都有詳細記錄,使用的時候要按照待測樣品zui大分子量不超過尺寸排阻色譜柱的排除界限分子量的規則來進行選擇。另外,在不超過排除界限分子量的前提下,盡量選擇排除界限分子量小的色譜柱比較合適。

  尺寸排阻色譜柱一般清洗流程如下:

  1. 將色譜柱與檢測器斷開;

  2. 將色譜柱反接后進行沖洗;

  3. 在低于50%zui大推薦流速的條件下沖洗色譜柱。注意柱壓的變化。如果柱壓超出正常水平許多,可降低流速或更換低粘度的緩沖液作為沖洗溶劑;

  4. 一般用清洗溶液沖洗10-15倍柱體積即可。更換溶液時請用3-5倍柱體積的經蒸餾的去離子水將尺寸排阻色譜柱沖洗干凈。

  尺寸排阻色譜柱為外來體分離和純化:

  尺寸排阻色譜柱包含具有約75納米的孔隙尺寸的樹脂。蛋白質和其他污染分子比外來體小進入的樹脂的孔,并在通過該柱的通道被延遲,在以后的級分洗脫。當與TRPS測量結合使用QEV列導致更高質量的外來體的測量和分析。

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