奧林巴斯熒光顯微鏡的原理

閱讀：733發(fā)布時(shí)間：2018-12-24

　　熒光顯微鏡是用來(lái)觀察研究樣品熒光現(xiàn)象的光學(xué)顯微鏡，目前主要用落射照明技術(shù)，由光源、濾片系統(tǒng)、光路系統(tǒng)等組成。

　　熒光光源——般采用超高壓汞燈(50一200W)或者高功率LED光源，它可發(fā)出各種波長(zhǎng)的光，但每種熒光物質(zhì)都有一個(gè)產(chǎn)生強(qiáng)熒光的激發(fā)光波長(zhǎng)，所以需加用激發(fā)濾片(一般有紫外、紫色、藍(lán)色和綠色激發(fā)濾片)，僅使一定波長(zhǎng)的激發(fā)光透過(guò)照射到標(biāo)本上，而將其他光都吸收掉。每種物質(zhì)被激發(fā)光照射后，在極短時(shí)間內(nèi)發(fā)射出較照射波長(zhǎng)更長(zhǎng)的可見(jiàn)熒光。熒光具有專一性，一般都比激發(fā)光弱，為能觀察到專一的熒光，在物鏡后面需加阻斷(或壓制)濾光片。它的作用有二：一是吸收和阻擋激發(fā)光進(jìn)入目鏡、以免于擾熒光和損傷眼睛，二是選擇并讓特異的熒光透過(guò)，表現(xiàn)出專一的熒光色彩。兩種濾光片必須選擇配合使用。濾片系統(tǒng)是熒光顯微鏡的重要組成部分，由激發(fā)濾片、二向色性濾光片、發(fā)射濾片組成。激發(fā)濾片位于光源和標(biāo)本之間，允許特定波長(zhǎng)范圍的光通過(guò)，作為樣品的激發(fā)光。發(fā)射濾片位于物鏡和目鏡之間，允許標(biāo)本發(fā)射的熒光通過(guò)，以獲得清晰的圖像。二向色性濾光片在激發(fā)濾片和發(fā)射濾片之間，是一種入射角為45º的干涉濾光片，它可以反射一定波長(zhǎng)的光同時(shí)透過(guò)另外波長(zhǎng)范圍的光線。

　　熒光顯微鏡廣泛應(yīng)用在生命科學(xué)領(lǐng)域，可對(duì)組織和細(xì)胞的結(jié)構(gòu)、形態(tài)、蛋白質(zhì)表達(dá)、亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)等進(jìn)行定位、定性觀察及分析。

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