HUVEC，人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞，上海細(xì)胞庫    

上海蒂科生物專注細(xì)胞培養(yǎng)，公司主營業(yè)務(wù)：胎牛血清（HAKATA、HyClone、SERANA、NTC、Corning、BOVOGEN、PAA、PAN、SIGMA等品牌），無外泌體血清(SBI)，ELISA試劑盒，細(xì)胞（400多種類通過STR鑒定）包含大鼠、小鼠、人、貓、株、兔子等種屬，HAKATA和HyClone培養(yǎng)基（干粉、液體）、雙抗、胰酶，CST，abcam，sigma等品牌抗體，詳詢。

★CQ★“細(xì)胞空泡化”在細(xì)胞培養(yǎng)中也是一個(gè)常見問題，它的出現(xiàn)原因有多種，實(shí)驗(yàn)人員碰到往往會很頭疼。

在文章中小編給大家列舉出了可能出現(xiàn)這種情況的原因，方便大家進(jìn)行分析選擇解決的方法。

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★CQ★可以引起細(xì)胞空泡化出現(xiàn)的原因有哪些那？

1）細(xì)胞老化

原代細(xì)胞培養(yǎng)的過程中經(jīng)常出現(xiàn)這樣的情況，是有些細(xì)胞處于終末分化狀態(tài)，不會再分裂，時(shí)間長了就會空泡化而死亡。

傳代細(xì)胞出現(xiàn)這種狀況比較少見，出現(xiàn)的原因一般都是因?yàn)榧?xì)胞傳代次數(shù)過多，老化嚴(yán)重。

2）PH值

培養(yǎng)液的PH值與細(xì)胞正常所需PH值差別太大。

3）胰酶消化

 胰酶消化時(shí)間過長，會導(dǎo)致細(xì)胞狀態(tài)受損，有時(shí)也會出現(xiàn)這種情況。除此之外，還有一個(gè)大家容易忽略的問題,在香港的一家科研機(jī)構(gòu)表明如果消化細(xì)胞吹打時(shí)力度過大，產(chǎn)生太多氣泡，長期存在也會出現(xiàn)這種現(xiàn)象。

4）自噬

細(xì)胞缺乏營養(yǎng)導(dǎo)致饑餓誘導(dǎo)形成自噬也會形成空泡化，但是這種空泡在光學(xué)顯微鏡下是看不到的，只有在電鏡下才能觀察到。

5）細(xì)胞代謝

在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，由于血清濃度不夠、藥物作用、外界刺激等情況下導(dǎo)致細(xì)胞代謝出現(xiàn)問題，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激狀況下會出現(xiàn)細(xì)胞空泡化的情況。

6）污染

衣原體感染：一旦一些細(xì)胞出現(xiàn)空泡化，繼續(xù)培養(yǎng)，空泡范圍會擴(kuò)大，即使傳代后也如此，出現(xiàn)這種情況，細(xì)胞基本無法挽救。后來檢測發(fā)現(xiàn)，此種細(xì)胞存在衣原體的感染。

★CQ★支原體污染：支原體污染在不嚴(yán)重的時(shí)候細(xì)胞是沒有什么明顯癥狀的，而且也無法通過光學(xué)顯微鏡觀察到，只有在嚴(yán)重的時(shí)候會導(dǎo)致細(xì)胞狀態(tài)變差，出現(xiàn)細(xì)胞空泡化的現(xiàn)象，細(xì)胞膜上也會出現(xiàn)小黑點(diǎn)附著。

★CQ★病毒污染：在文獻(xiàn)上也有說病毒污染也會導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)空泡化的情況。

遇到細(xì)胞空泡化我們應(yīng)該如何解決？

1）如果是因?yàn)榧?xì)胞老化的原因，可以通過復(fù)蘇代數(shù)靠前的細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)。

2）如果是培養(yǎng)液PH的問題，可以通過更換培養(yǎng)液調(diào)整到合適的PH值，再進(jìn)行培養(yǎng)。

3）在傳代時(shí)，要選用合適濃度的胰酶和選取適當(dāng)?shù)南瘯r(shí)間進(jìn)行消化，在操作時(shí)避免吹打太過用力出現(xiàn)太多氣泡。

4）要保證細(xì)胞培養(yǎng)所需的營養(yǎng)充足，可以通過增加血清濃度和在培養(yǎng)基中加入谷氨酰氨解決。

5）盡量使用質(zhì)量好和渠道正規(guī)的胎牛血清，因?yàn)檫@樣的血清營養(yǎng)豐富且外源刺激因子少，可以有效的避免出現(xiàn)這類問題。

6）在細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)要嚴(yán)格進(jìn)行無菌操作，操作時(shí)要規(guī)范，減少污染的可能性。可以通過試劑盒檢測細(xì)胞是否污染，對于已經(jīng)污染的細(xì)胞滅菌后直接處理，避免污染其他細(xì)胞。

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