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蒂科(上海)生物科技有限公司

細胞培養中出現黑膠蟲污染怎么辦?

時間:2022-9-1閱讀:1193

    “黑膠蟲"可寄生于動物細胞,也可以生存于培養基中,依靠細胞和培養基中的營養為生,并隨細胞傳代而傳代。可見“黑膠蟲"是一種異養生物。我們在細胞培養中出現黑膠蟲后污染怎么辦?下面有幾個處理建議,我們一起來了解下吧!


1.換好一點的血清,這樣可以有效減少“小黑點"的形成。一般的血清都不要去滅活處理,為什么呢?


    因為經過正確處理的熱滅活血清,對大多數的細胞而言是不需要的。經此處理過的血清對細胞的生長只有微小的促進,或*沒有任何作用,甚至通常因為高溫處理影響了血清的質量,而造成細胞生長速率的降低。而經過熱滅活的血清,沉淀物的形成會顯著增多,這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察,像是“小黑點",常常會讓研究者誤以為是血清遭受污染,而把血清放在37℃環境中,又會使此沉淀物更增多,使研究者誤認為是微生物的分裂擴增。除非是在做免疫學研究或培養干細胞、昆蟲細胞和平滑肌細胞時,才推薦做熱滅活。所以在不是做免疫學研究或培養干細胞、昆蟲細胞和平滑肌細胞培養時,血清盡量不經熱滅活。


2.如果是貼壁細胞的話,可用無菌的PBS洗幾次,可一定程度上緩解。若是懸浮的話,就不太好處理拉,可以向其中少加一點滋養細胞。加滋養細胞對有黑膠蟲的剛復蘇的細胞很有效!還有就是實驗環境要注意好,保持細胞間整個環境的潔凈度。如果細胞不是非常珍貴,可以用伯氨奎、磺胺、四環素、貝尼爾,也有建議慶大霉素500ug/ml洗滌。


3.換用好的一次性塑料培養瓶。


4.停止復蘇,停止養細胞,*消毒所有用于細胞培養的一切用品,包括所用的培養瓶,培養基,吸管,胰酶,孵箱,超凈臺、空間等等你能想到的和細胞培養相關的所有物品。一個星期后,再復蘇污染之前凍存的細胞,注意你的白大衣衣袖污染即可。這樣你可能覺得動作太大,但可以用一個星期的時間挽救兩個月的時間,還有其他你為了找到污染源,去除污染所耗費的精力,和財力。


5.在換液前先加入生理鹽水并輕輕拍打,沖洗干凈后再加入培養液,堅持天天洗,傳代時加生理鹽水再離心一次,接種密度稍大一些,一段時間后,蟲子就會大大減少,對細胞的生長也不會有大的影響。


    所有東西最好重配;如果實在要搶救,重點突破,留幾瓶污染不是很嚴重的細胞搶救,其余棄去


6.如果有其它可用的細胞,那么污染的細胞最好扔掉;如沒有,可試著用抗生素,可靠的是細菌培養加藥敏,據藥敏結果選擇抗生素,當然不能影響到細胞的狀態。


7.有材料稱minocycline具有一定的作用,可以和換液結合起來使用。


    由于黑膠蟲尚未明確鑒定出是什么生物,所以上述的處理方法不一定正確,可以供考慮采用。


8.有人為尋找到殺滅“黑膠蟲"的方法,做了一個試驗,他取有“黑膠蟲"污染的六孔板,每孔內有2ml培養液,向有污染的孔內分別加入0.5ml、1ml、2ml、3ml的新潔爾滅原液,邊加邊在倒置顯微鏡下觀察。最后他得出結論:新潔爾滅與水或培養基的比例為1:4時即可殺死“黑膠蟲"。但是新潔爾滅對細胞的負面影響太大,比較珍貴的細胞培養最好不采用此方法。


    在細胞培養實驗中,人們遇到的黒膠蟲并不都是一樣的,有像細菌的、有像支原體的、有原蟲的、有真菌的,還有細胞碎片的。在國內個實驗室的器材條件參差不齊,而且實驗人員的操作質量也不盡相同,同一種現象也可能有些許差異,當用描述出來的現象的差異可能變大也可能變小。所以很多人看到細胞被細菌污染了,不好處理,而卻描述出來的現象和流傳的黑膠蟲類似,就會把培養失敗的原因歸結到無法處理的黒膠蟲污染,甚至可能說它發現的是真正的黑膠蟲。這樣的事情多了,黑膠蟲就會人為的變種,什么的都有。黑膠蟲是否存在,還有待于科學的發展。但有一點可以肯定的,大部分人發現的“黒膠蟲"并不是真正那個未知的黒膠蟲,而是不很常見的細菌、真菌、原蟲等微生物污染。


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