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蒂科(上海)生物科技有限公司

抗體的儲(chǔ)存條件

時(shí)間:2022-1-4閱讀:5493

抗體由于性質(zhì)和所使用的儲(chǔ)存條件不同,其存儲(chǔ)的“保質(zhì)期"可能從幾周到幾年不等。盡管每個(gè)抗體存儲(chǔ)的最佳條件是*的,但我們還是能夠總結(jié)出一些關(guān)于抗體存儲(chǔ)建議和一般準(zhǔn)則。

抗體的儲(chǔ)存時(shí)間取決于抗體固有的性質(zhì)和儲(chǔ)存條件。抗體(尤其是酶)必須存放在適當(dāng)?shù)臏囟群蚿H值范圍。為了維持蛋白質(zhì)的活性、防止其聚集,經(jīng)常保存在一定濃度的甘油,蔗糖,或類似的物質(zhì)里面。

1、低溫儲(chǔ)存對(duì)于抗體的保存至關(guān)重要

一般來說,抗體最好存放在≤4℃的清潔,滅菌的玻璃或塑料管。貯存在室溫下通常會(huì)由于微生物的生長導(dǎo)致抗體退化和/或失活。抗體儲(chǔ)存液放在4℃環(huán)境中1天或者幾周內(nèi)其活性不會(huì)受到明顯影響。另外,抗體中可以加入終濃度為50%的甘油或乙二醇儲(chǔ)存于-20℃。通常我們?yōu)榱吮苊夥磸?fù)凍融,可以分裝抗體。我還可以加入抗微生物藥物(如疊氮化na或硫柳汞)以避免微生物的生長。

帶有標(biāo)記的抗體最好存放在終濃度為50%的甘油或乙二醇里并防止在-20℃的環(huán)境中。盡管有些酶結(jié)合物可以不加抗凍劑儲(chǔ)存在-20℃,但是這些抗體必須分裝使用以防止反復(fù)凍融,尤其是堿性磷酸酶偶聯(lián)對(duì)凍融特別敏感。帶有標(biāo)記的抗體通常可以在甘油或乙二醇中于-20℃保存1-2年。但是,在冷凍保護(hù)劑的污染物可能會(huì)影響酶的活性。

一些研究人員發(fā)現(xiàn)多克隆抗體在血清中于-20℃保存十年其活性損失不大。然而,一旦抗體被純化后,儲(chǔ)存在50%的甘油中于-20℃保存,即使沒有凍融,其活性的損失也可以觀察到,盡管其進(jìn)程仍然非常緩慢。但許多研究者需要將這些多克隆抗體注射到動(dòng)物體內(nèi),為了避免內(nèi)毒素的干擾,一般都不加入甘油。而且大量研究表明:即使沒有甘油,只要你不反fu凍融,抗體也可以存儲(chǔ)在-20℃幾年甚至幾十年。另一個(gè)重要的事情是,該抗體濃度應(yīng)高于1毫克/毫升,因?yàn)橄〉目贵w容易失去活性而且容易造成物理吸附導(dǎo)致的損失。而單克隆抗體可以用兩種方式保存:第一,保存在50%的甘油存放于-20℃;第二,也是比較好的方式,將其保存在飽和硫酸銨于4℃或-20℃(4℃更好)保存。多年未見有失活、細(xì)菌滋生以及氧化。有些研究人員為了長期儲(chǔ)存抗體,將抗體分裝后放置于液氮中。然而抗體存儲(chǔ)在-20℃或-80℃更常見,因?yàn)閮鋈诮档偷鞍踪|(zhì)的穩(wěn)定性,所以我們一定要分裝抗體使用,這樣就可以避免抗體的反復(fù)凍融。而凍干法(冷凍干燥,干燥或從冰凍狀態(tài))為一些冰凍以后不穩(wěn)定抗體提供了一種替代的保存方法。在大多數(shù)情況下,凍干的抗體最好是存放在-20℃。雖然冷凍干燥有許多優(yōu)點(diǎn),它需要昂貴的設(shè)備和勞動(dòng)力。

2、向抗體儲(chǔ)存液中加入抗氧化劑是防止抗體因氧化失效的關(guān)鍵步驟

氧化反應(yīng)是某些酶,尤其是巰基酶的共同問題。為了防止氧化反應(yīng)對(duì)抗體的破壞,我們可以向抗體中加入一些還原劑(如二硫蘇糖醇(DTT)或2 - 巰基乙醇(2-ME))。實(shí)驗(yàn)證明:越高的pH環(huán)境和溫度,這些有酶活性的抗體的保存時(shí)間越短。此外,加入0.1mM的銅離子其氧化率增加,而加入金屬螯合劑EDTA增加其保存的有效期。

3、蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑和抗生素對(duì)于抗體的穩(wěn)定儲(chǔ)存也發(fā)揮著重要作用

蛋白質(zhì)穩(wěn)定試劑可以延長大多數(shù)蛋白質(zhì)在4℃或-20℃的保質(zhì)期。而25-50%的甘油或乙二醇等防凍劑有助于穩(wěn)定抗體,防止在-20℃環(huán)境中形成冰晶,避免其破壞蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)。蛋白酶抑制劑的加入可以防止抗體發(fā)生水解反應(yīng)導(dǎo)致其失活。而抗微生物藥物,如最終濃度在0.02-0.05%(W / V)的疊氮化na(NaN3的)或終濃度為0.01%(W / V)的硫柳汞可以抑制微生物的生長。

4、抗體的儲(chǔ)存濃度對(duì)于抗體保存的有效期也有顯著影響

抗體濃度過低(<1毫克/毫升)更容易發(fā)生抗體的失活以及增加物理吸附造成的損失。因此,我們都要盡量的保持抗體(例如,大于1毫克/毫升)在儲(chǔ)存期間的濃度。通常的做法是添加“載體"蛋白質(zhì),如純化牛血清白蛋白(BSA)以防止這種降解和損失。


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