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原代細胞培養(yǎng)中常見的一些錯誤

時間:2021-12-13閱讀:1119

原代細胞(primary culture cell)是指從機體取出后立即培養(yǎng)的細胞。原代細胞不僅廣泛應(yīng)用于分子、細胞生物學(xué)和生物醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)研究,如蛋白質(zhì)組學(xué)、基因組學(xué)、細胞株(系)研究、DNA,RNA和遺傳學(xué)研究等,還可應(yīng)用于當(dāng)今熱門的生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)如藥物篩選、藥物代謝和毒理研究、癌癥藥物的研究等。


原代細胞如何進行培養(yǎng)?

常用的原代細胞培養(yǎng)有組織塊培養(yǎng)和分散細胞培養(yǎng)。

分散細胞培養(yǎng)大致步驟為:將動物組織從機體中取出離散成單個細胞(常用胰蛋白酶),置合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng),使細胞 得以生存、生長和繁殖(注意整個過程無菌)。

組織塊培養(yǎng)是將剪碎的組織塊直接移植在培養(yǎng)瓶壁上,加入培養(yǎng)基后進行培養(yǎng)。


原代細胞培養(yǎng)中的常見錯誤及正確操作方法?

錯誤#1:一小管原代細胞在水浴中解凍一段時間

糾正#1:原代細胞對解凍過程非常敏感,因此將小瓶置于37℃水浴中,保持并輕輕旋轉(zhuǎn)直到內(nèi)容物剛剛解凍是很重要的。然后應(yīng)立即從水浴中取出小瓶,并轉(zhuǎn)移到無菌操作臺。確保您的培養(yǎng)瓶在解凍前已經(jīng)準備就緒,以便可以立即用于接種細胞,并置于培養(yǎng)箱中。


錯誤#2:解凍小瓶后直接離心原代細胞

糾正#2:我們不建議在解凍后離心細胞,因為離心程序比少量的DMSO殘留更有害。記住,在恢復(fù)原代細胞后的第二天更換培養(yǎng)基以去除任何殘留的DMSO。


錯誤#3:允許原代細胞變得過于融合

糾正#3:當(dāng)生長至100%匯合時,原代細胞可以變得衰老。記住,原代細胞不是100%純,因此重要的是盡量減少污染細胞的生長。我們建議在細胞達到90-95%融合時,對原代細胞進行傳代培養(yǎng)。

錯誤#4:傳代原代細胞時過度胰蛋白酶消化

糾正#4:當(dāng)細胞傳代時,使用低濃度的胰蛋白酶并在顯微鏡下密切監(jiān)測細胞。此外,記得在胰蛋白酶消化后*中和細胞中的胰酶,因為任何活性的胰蛋白酶都將損傷細胞。推薦專門為原代細胞配制的胰蛋白酶中和溶液,但也可以使用10%血清或大豆胰蛋白酶抑制劑。


錯誤#5:原代細胞可以很容易地重新凍存

糾正#5:通常我們不推薦重新凍存原代細胞,因為這可以促進細胞衰老和/或?qū)е鹿δ茏兓T毎浅C舾校匦聝鼋Y(jié)可能導(dǎo)致細胞死亡或損傷。


錯誤#6:原代細胞可以無限的增殖

糾正#6:與細胞系不同,原代細胞具有有限的擴增能力。我們建議盡早使用原代細胞進行實驗以防止遺傳漂移。此外,如果你正在使用一個增值困難的細胞類型,你應(yīng)該密切監(jiān)測細胞形態(tài),因為少量混雜的細胞(如成纖維細胞)可能隨著時間的推移,大量生長從而成為主要細胞。

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