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動物源性食品中β-受體激動劑類藥物殘留的測定

閱讀:3027        發布時間:2018-6-25

 

β-受體激動劑(β-agonists)是一類人工合成藥物,主要用于防治人、獸支氣管哮喘和支氣管痙攣。β-受體激動劑在體育比賽中可用于增強運動員、動物(如馬)肌肉,提高運動成績,奧委會將β-受體激動劑列為禁用藥物。β-受體激動劑根據苯環取代基結構分為苯胺型(如:克倫特羅,俗稱:瘦肉精)、苯酚型(沙丁胺醇)、間苯二酚型(如:特布他林)。

 

80年代,國內外研究表明,在飼料中添加β-受體激動劑具有營養再分配作用,可以明顯提高瘦肉率。1992年,西班牙發生物多人食用含β-受體激動劑的畜產品中毒事件;1997年,香港發生進食大陸供港豬的內臟引起人中毒等事件。隨著中國加入WTO后,國外對于中國出口的食品提出更高的要求,我國因獸藥殘留問題出口歐盟肉制品也屢次受阻;普通大眾也需要無公害食品。因此,對β-受體激動劑的分析研究不僅在臨床藥物代謝動力學上、體育運動中,而且在食品安全方面都有重要意義。目前,我國對β-受體激動劑的檢測方法主要有GB/T 22286-2008 動物源性食品中多種β-受體激動劑殘留量的測定 液相色譜串聯質譜法及GB/T 21313-2007 動物源性食品中β-受體激動劑殘留檢測方法 液相色譜-質譜/質譜法等。

本方法建立了β-受體激動劑藥物藥物在豬肝、豬肉、牛奶和雞蛋等動物源性食品中的LC/MS/MS檢測方法,其基本原理為:組織樣品中的β-受體激動劑殘留藥物經酶解,用高氯酸調節pH值后,在酸性條件下沉淀蛋白,上清液用Retain-CX固相萃取柱凈化,Hypersil Gold HPLC色譜柱分離,液相色譜-串聯質譜(LC/MS/MS)法檢測。方法靈敏度、提取回收率、重現性等均滿足國內外監控和檢測要求。

 

樣品前處理

酶解

動物源性樣品2g(到0.01g)于50mL 離心管中,加入0.2mol/L 乙酸胺溶液(pH5.2)10mL 然后加入β- 鹽酸葡萄糖醛苷酶/ 芳基硫酸酯酶40μL,渦旋混勻3min,于37℃下水浴避光振蕩16h。

 

提取

樣品酶解后放置至室溫,渦旋混勻3min,高速離心10min,取出上清液,加入1mol/L 高氯酸溶液1mL,渦旋,混勻,高速離心10min 后,轉移上清液至另一50mL離心管內。

 

 

SPE操作步驟

200mg 3mL HyperSep Retain-CX 固相萃取柱

(貨號:60107-304)

 

活化

3mL 甲醇,3mL 水,3mL 0.5mol/L 高氯酸

上樣

將上清液上樣至小柱中(1d/s)

清洗

3mL 水,3mL 甲醇,柱子抽干

洗脫

3mL 5% 氨水甲醇溶液

 

儀器條件

 

色譜條件

色譜柱:Hypersil Gold,5μm,2.1×150mm(貨號:25005-152130

流動相A: 水(5mM 乙酸銨) B: 甲醇

梯度洗脫程序

 

進樣量:10μL

流速:250μL/min

 

 

質譜條件

電噴霧電離源(ESI),正離子模式

選擇反應監控(SRM)掃描模式

噴霧電壓:4500V

離子傳輸管溫度:350℃

 

實驗數據

回收率:75-120%

定量限(LOQ):本方法沙丁胺醇、非諾特羅、氯丙那林、萊克多巴胺、克侖特羅、妥布特羅、噴布特羅和心得安在豬肝、豬肉、牛奶和雞蛋等動物源性食品組織中的定量限均可達0.1μg/kg,西馬特羅、特布他林為0.5 μg/kg。

 

結論

本方法建立了β-受體激動劑藥物藥物在豬肝、豬肉、牛奶和雞蛋等動物源性食品中的LC/MS/MS檢測方法,其基本原理為:組織樣品中的β-受體激動劑殘留藥物經酶解,用高氯調節pH值后,在酸性條件下沉淀蛋白,上清液再用Retain-CX固相萃取柱凈化,Hypersil Gold HPLC色譜柱分離,液相色譜-串聯質譜(LC/MS/MS)法檢測。提取回收率均可達75-120%,滿足國內外的低檢出限要求,并且定量定性準確,重現性好。

 

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