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上海閃譜生物科技有限公司

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蛋白層析純化系統選擇和使用的一些說明

閱讀:936      發布時間:2022-7-25
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  蛋白層析純化系統集凝膠過濾、分配層析和吸附層析于一體,適合于親脂性小分子化合物的純化,能將結構性能非常相近的有機物進行分離,尤其適合中草藥中具有生理活性有效成分的分離。
  蛋白層析純化系統的選擇及使用:
  針對實驗室級別的蛋白純化層析系統進行介紹,蛋白純化層析系統為模板,對蛋白純化層析系統的硬件及軟件部分,例如系統泵、buffer選擇閥、收集系統、檢測器、柱前柱后壓等如何選擇及工作原理進行詳細的講解。
  1、蛋白純化層析系統與HPLC的區別。
  2、硬件各部分的選擇。
  3、定量環、定量杯的安裝及使用,定量環、定量杯、系統泵、樣品泵上樣的優點。
  4、系統中壓力產生的原因,如何保護層析柱。
  5、延遲體積對峰型及收集的影響。
  蛋白層析純化系統的操作步驟:
  1.打開電腦,進入AKTA系統。
  2.打開AKTA電源,連接系統。
  3進入UniCorn系統。
  4.用水洗A泵。
  5.設置層析柱的壓力上限及適當的流速。
  6.將Superdex200TM層析柱或Superdex75TM層析柱與FPLC連接。
  7.用至少1個柱體積的水沖洗層析柱。
  8.用至少1個柱體積的緩沖溶液平衡層析柱。
  9.將準備好的樣品于4℃,12000rpm離心10-20min。
  10.在Load狀態下通過上樣環上樣。
  11.在Inject狀態下樣品進入系統,并在2mL時調回Load狀態。
  緩沖液(流動相)和樣品流過柱子,分子進入不同的材料孔中。小一些的分子移動的距離更。

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