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選購高通量型化學發光酶標儀時要考慮測定波長參數

閱讀:1041      發布時間:2019-1-10
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  高通量型化學發光酶標儀作為一個常用的儀器,其基本功能不外乎一個比色測定,與比色計所不同的是在測定波長范圍、吸光度范圍、光學系統、檢測速度、震板功能、溫度控制、定性和定量測定軟件功能等方面的差異,當然全自動酶免疫分析系統還具有自動洗板、溫育、加樣等功能。我們在選購高通量型化學發光酶標儀時應該考慮儀器的濾光系統和測定波長參數:
  一、濾光系統
  高通量型化學發光酶標儀簡單的是用濾光方式來劃分。一般來說,可以分為濾光片型和光柵型兩大類。也有一些高通量型化學發光酶標儀里面同時裝上了濾光片和光柵。但是濾片和光柵并不能同時完成同一個檢測,本質上還只是把濾片和光柵放在了一起,并沒有使兩者糅合而產生新的技術突破。
  光柵型濾光系統具有使用方便,可以進行光譜掃描,靈活性等優點。當然,濾光片系統也有其顯著的優勢,例如價格較為便宜,檢測靈敏度高,帶寬的可選擇性,可以進行快速的濾光片切換,可配備有自動加樣系統,在化學發光檢測中光線的透過率高。
  目前,濾光片系統應用更廣,因為它可以讓實驗者完成更多的試驗。
  二、測定波長
  一般高通量型化學發光酶標儀的測定波長在400~750nm或800nm之間,*可以滿足ELISA的顯色測定。目前國內常見的ELISA試劑盒所使用的標記用酶均為辣根過氧化物酶(HRP),底物通常為四甲基聯苯胺(TMB)和鄰苯二胺(OPD),其在過氧化氫溶液的存在下,經HRP作用,分別氧化為2,2,—二氨基偶氮苯(DAB)和聯苯醌。當pH值為5.0左右時,DAB在450nm波長處有大吸收,當pH值降為L0時,大吸收波長移至492nm,同時摩爾消光系數變大,顯色加深,因而常用強酸如硫酸或鹽酸終止反應。TMB的氧化產物聯苯醌在波長450nm處有大消光系數,如果HRP量少,H:O:和TMB過量時,則形成藍色的陽離子根。降低pH,即可使藍色的陽離子根轉變為黃色的聯苯醌,使用硫酸作為終止劑可使產物穩定90min。因此,450nm和492nm兩個波長是目前ELISA測定常用的。各種高通量型化學發光酶標儀都配有放置濾光片的可自動轉換的部件,可以同時安裝6~8片濾光片,所配備的濾光片均應包括上述兩個波長,有的高通量型化學發光酶標儀以490nm濾光片替代492nm濾光片,影響不大。除了這兩個基本濾光片外,考慮到雙波長比色的需要,還應有620nm或630nm或650nm和405nm波長的濾光片,其他濾光片可根據自己的需要選擇。有時,有的實驗室希望用高通量型化學發光酶標儀作微量生化測定,故高通量型化學發光酶標儀生產廠家對其生產的高通量型化學發光酶標儀擴展了紫外檢測功能,此時需要一個340nm波長濾光片。此時,高通量型化學發光酶標儀的測定波長范圍就成為340—750nm或800nm。
  高通量型化學發光酶標儀有單波長和雙波長檢測功能。有時使用者不知在什么情況下使用單或雙波長檢測。所謂的“單波長”就是使用一種對顯色具大吸收的波長即450nm或492nm進行比色測定;而“雙波長”則除了用對顯色具大吸收的波長即450nm或492nm進行比色測定外,同時用對特異顯色不敏感的波長如630nm進行測定,高通量型化學發光酶標儀后打印出來的吸光度則為二者之差。630nm波長下得到的吸光度是非特異的,來自于板孔上諸如指紋、灰塵、臟物等所致的吸收。因此,在ELISA比色測定中,好使用雙波長,且不必設空白孔。

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