嘔吐毒素（Deoxynivalenol）ELISA檢測試劑盒

產品名稱：嘔吐毒素ELISA檢測試劑盒

產品概述：脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(deoxynivalenol，DON)又稱嘔吐毒素(vomitoxin)，主要是由鐮刀菌的某些種產生的化學結構和生物活性相似的有毒代謝產物——單端孢霉烯族化合物中的一種。DON 的主要產生菌是禾谷鐮刀菌(Fusariumgraminearum)，DON廣泛存在于，主要污染小麥、大麥、玉米等谷類作物，也污染糧食制品，人和動物在誤食被該毒素污染的糧谷類后可以產生廣泛的毒性效應。近年來發現DON可能與人類食管癌、IgA有關，對人類及動物的健康構成威脅。DON屬于劇毒或中等毒物，人畜攝入了被DON污染的食物／飼料后，會導致厭食、嘔吐、腹瀉、發燒、站立不穩、反應遲鈍等急性中毒癥狀，嚴重時損害造血系統造成死亡。研究表明，DON可能對免疫系統有影響，有明顯胚胎毒性和一定致畸作用，可能有遺傳毒性，但無致癌、致突變作用。由于DON的危害嚴重，引起了各國的普遍重視。谷物及飼料中DON的含量有嚴格的*。我國谷物中DON 的*為1．0 mg／kg 。因此，有必要對其進行有效的監控。HPLC或GC-MS用作檢測嘔吐毒素的方法，但是其前處理步驟繁瑣，費用昂貴。酶聯免疫檢測試劑盒則可經濟、快速地檢測嘔吐毒素。

適用范圍

嘔吐毒素ELISA檢測試劑盒可定性、定量測定大米、小米、面等谷物和飼料中的嘔吐毒素。

試驗原理

 采用競爭ELISA，在微孔板上預包被嘔吐毒素抗原，加入樣本/嘔吐毒素標準品溶液及辣根過氧化物酶標記的嘔吐毒素抗體。樣本或標準品溶液中的嘔吐毒素與預包被在板孔上的嘔吐毒素抗原競爭結合辣根過氧化物酶標記的嘔吐毒素抗體，與樣本或標準品溶液中的嘔吐毒素結合的酶標抗體在洗滌時被除去。再加入TMB顯色，讀取吸光值。樣本的吸光值與其所含殘留物嘔吐毒素抗原的含量成負相關。對照標準曲線，即可得出相應殘留物嘔吐毒素的含量。

試劑配制

1  洗滌工作液：用去離子水將濃縮洗滌液按1:9體積比進行稀釋（1份濃縮洗滌液+9份去離子水）。

2、樣品提取液：用去離子水將濃縮樣品提取液按1:9體積比       進行稀釋（1份濃縮樣品提取液+9份去離子水）。

操作步驟

1、將所需試劑從冷藏環境中取出，置于室溫（20～25℃）平衡30min以上，注意每種液體試劑使用前均須搖勻。

2、取出需要數量的微孔板，將不用的微孔板放進原錫箔袋中并且與提供的干燥劑一起重新密封，保存于2～8℃。不要冷凍。

3、洗滌工作液在使用前也需回溫。

4、將樣本和標準品對應微孔按序編號，每個樣本和標準品做2孔平行，并記錄標準孔和樣本孔所在的位置。

5、加標準品/樣本50ml到對應的微孔中，加入稀釋好酶標物50ml/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置室溫避光環境中反應15min。

6、小心揭開蓋板膜，將孔內液體甩干，用洗滌工作液300ml/孔，充分洗滌5次，每次間隔30s，用吸水紙拍干。

7、加入顯色液100ml/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置室溫避光環境反應15min。

8、加入終止液50ml/孔，輕輕振蕩混勻，設定酶標儀于450nm處測定每孔OD值。

注意事項

1.  室溫低于20℃或試劑及樣本沒有回到室溫（20～25℃）會導致所有標準的OD值偏低。

2.  在洗板過程中如果出現板孔干燥的情況，則會出現標準曲線不成線性，重復性不好的現象。所以洗板拍干后應立即進行下一步操作。

3.  每加一種試劑前需將其搖勻。

4.  反應終止液為2M鹽酸，避免接觸皮膚。

5.  不要使用過了有效日期的試劑盒；也不要使用過了有效期的試劑盒中的任何試劑，摻雜使用過了有效期的試劑盒會引起靈敏度的降低；不要交換使用不同批號試劑盒中的試劑。

6.  儲存條件：

7.  保存試劑盒于2～8℃，不要冷凍，將不用的酶標板微孔板放進自封袋重新密封。標準物質和無色的發色劑對光敏感，因此要避免直接暴露在光線下。

8.  試劑變質的跡象：

9.  發色試劑有任何顏色表明發色劑變質，應當棄之。0標準的吸光度（450/630nm）值小于0.5（A450nm<0.5）時，表示試劑可能變質。

10.  在加入顯色液后，一般顯色時間為20～30min即可。若顏色較淺，可延長反應時間到35min（或更長），但不得超過40min。反之，則減短反應時間。

*反應溫度為25℃，溫度過高或過低將導致檢測吸光度值和靈敏度發生變化。

試劑盒組成

1. 96孔酶標板×1塊

2. 標準液×6瓶：（1ml/瓶）

0ppb, 3ppb, 9ppb, 18ppb, 36ppb,72ppb

3. 酶標物1瓶………………………………………… 6ml

4. 顯色液1瓶…………………………………………12ml

5. 終止液………………………………………………6ml

6. 濃縮洗滌液 （10×）………………………………40ml

7. 濃縮樣品提取液（10×）…………………………40ml

貯藏條件及保存期

        貯藏條件：保存試劑盒于2～8℃。

       保存期：有效期為12個月。

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