PriboFast維生素B12免疫親和柱

【產(chǎn)品描述】

免疫親和柱可用于食品/飼料中維生素B12的萃取液的凈化處理，性能穩(wěn)定，操作簡(jiǎn)單快速。柱內(nèi)含有維生素

B12抗體，以共價(jià)鍵形式粘附于凝膠顆粒上。

【儀器試劑】

【樣品準(zhǔn)備】

所有水狀溶液都可作為樣品檢測(cè)，但要確保其pH為7±0.5，否則，先用1N鹽酸或NaOHpH。如果樣品不清澈，需先離心，以免阻塞免疫親和柱。

固體樣品

1）一般的水溶性樣品可以溶解后直接分析。將樣品溶解于雙蒸水后，調(diào)節(jié)pH為7±0.5，注意要預(yù)先除去混濁物。

2）可以選擇離心、過(guò)濾、Carrez試劑沉淀等方法凈化樣品。取樣品溶液5ml分別加入250ul Carrez I 試劑和250ulCarrez II試劑，然后離心除去沉淀物。

3）難溶于冷水的樣品，可通過(guò)溫育加熱使其溶解。

4）對(duì)于不溶性如谷物類樣品，要先將樣品進(jìn)行粉碎成中細(xì)粒粉末，稱取2g樣品溶于10ml雙蒸水中，振蕩器上震蕩30分鐘（120次/分）。也可用磁轉(zhuǎn)子混勻。然后將溶液過(guò)濾或在3000轉(zhuǎn)離心5分鐘，調(diào)節(jié)pH為7±0.5，然后用于過(guò)柱。

液體樣品

1）對(duì)于高脂性樣品奶油類，為分離脂肪，需先低溫離心15分鐘（2-8℃，3000轉(zhuǎn)）。

2）除去脂肪層后直接將樣品過(guò)柱。如果樣品是高度粘稠，還需用0.01M的PBS溶液進(jìn)行稀釋（按1:2－1:10的倍數(shù)）。

3) 富含蛋白樣品需預(yù)先除去蛋白。每5ml樣品中加入20ul濃鹽酸(36％)，在60℃溫育45分鐘。然后離心10分鐘(3000轉(zhuǎn))，用1N的鹽酸調(diào)節(jié)pH到7±0.5

10分鐘(3000轉(zhuǎn))，用1N的鹽酸調(diào)節(jié)pH到7±0.5

【操作步驟】

1）每個(gè)樣品需用一個(gè)新柱子；

2）將柱子和樣品溶液處于室溫；

3）取下免疫親和柱的塞子，割下塞子上突出的部分，將這個(gè)不再密封的塞子放回柱子上；

4）將柱子與注射器連接，用鐵夾子整個(gè)固定起來(lái)。柱子下面放一個(gè)燒杯。

5）將準(zhǔn)備好的樣品溶液加入注射器里，并取下柱底部的蓋子。

6）樣品溶液在重力下過(guò)柱；

7過(guò)完柱后用10ml蒸餾水到注射器清洗，過(guò)柱。水流過(guò)柱子后，用推桿讓1-2倍的空氣再經(jīng)過(guò)柱子。

8）將干凈的試管放在柱子底部。加1ml純甲醇到（干的）注射器里，重力下通過(guò)柱子。如果甲醇過(guò)柱的速度慢，可以在過(guò)柱開(kāi)始時(shí)用壓力泵（盡量不要全程使用壓力泵）。提取的時(shí)間不要少于1分鐘。

9）讓部分空氣通過(guò)柱子，收集剩余的甲醇洗提液。

10）取50μl加到HPLC進(jìn)樣。