高效液相色譜早期使用隔膜和停流進樣器，裝在色譜柱入口處，現在大都使用六通進樣閥或自動進樣器。進樣裝置要求：密封性好，死體積小，重復性好，保證中心進樣，進樣時對色譜系統的壓力、流量影響小。
HPLC進樣方式可分為：隔膜進樣、停流進樣、閥進樣、自動進樣。
1.隔膜進樣。用微量注射器將樣品注入專門設計的與色譜柱相連的進樣頭內，可把樣品直接送到柱頭填充床的中心，死體積幾乎等于零，可以獲得的柱效，且價格便宜，操作方便。但不能在高壓下使用(如10MPA以上)；此外隔膜容易吸附樣品產生記憶效應，使進樣重復性只能達到1～2%；加之能碉各種溶劑的橡皮不易找到，常規分析使用受到限制。
2.停流進樣。可避免在高壓下進樣。但在HPLC中由于隔膜的污染，停泵或重新啟動時往往會出現“鬼峰”，另一缺點是保留時間不準。在以峰的始末信號控制餾分收集的制備色譜中，效果較好。
3.閥進樣。一般HPLC分析常用六通進樣閥，其關鍵部件由圓形密封墊子(轉子)和固定底座(定子)組成。由于閥接頭和連接管死體積在存在，柱效率低于隔膜進樣(約下降5～10%左右)，但耐高壓(35～40MPA)，進樣量準確，重復性好(0.5%)，操作方便。
六通閥進樣方式有部分裝液法和*裝液法兩種。
①用部分裝液法進樣時，進樣量應不大于定量環體積的50%(多75%)，并要求每次進樣體積準確、相同。此法進樣的準確度和重復性決定于注器取樣的熟練程度，而且易產生由進樣引起的峰展寬。
②用*裝液法進樣時，進樣量應不小于定量環體積的5～10倍（少3倍），這樣才能*置換定量環內和流動相，消除管壁效應，確保進樣的準確度及重復性。
六通閥使用和維護注意事項
①樣品溶液進樣前必須用0.45UM濾膜過濾，以減少微粒對進樣閥的磨損。
②轉動閥芯時不能太慢，更不能停留在中間位置，否則流動相受阻，使泵內壓力劇增，甚至超過泵的大壓力；轉到進樣位時，過高的壓力將使柱頭損壞。
③為防止緩沖鹽和樣呂殘留在進樣閥中，每次分析結束后應沖洗進樣閥。通常可用水沖洗，或先用能溶解樣品的溶劑沖洗，再用水沖洗。
4.自動進樣。用于大量樣品的常規分析。
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