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柱效?理論塔板數?大揭秘

閱讀:6980      發布時間:2022-5-9
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在日常分析中,我們會評估一支色譜柱、一個項目的柱效,在藥典中,檢查藥物的含量時,規定了系統適應性試驗中理論塔板數要求。那柱效、理論踏板數的關系是什么,怎么得到最佳柱效,今天小編和大家分享。

溶質分子在通過色譜柱時,擴散圍成一個比較大的體積(或形成一個比較寬的譜帶)。當色譜帶離開色譜柱在色譜圖上產生一個色譜峰時,它的寬度可以用不同的方式定義。如下圖。


微信截圖_20220509160058.png

從峰的兩邊畫正切線(通過拐點),它們和基線的交點就是峰寬W的值。柱效用于描述色譜柱提供窄峰的相對能力,用塔板數N定義:

微信截圖_20220509160109.png

比如,如上圖中,色譜峰i的峰寬W等于(4.00-3.85)=0.15min,保留時間tR=3.93min。因此塔板數N=16(3.93/0.15)2=10980。塔板數N會因樣品、分離條件和色譜柱的不同有很大區別。

峰寬可以更加方便(和精確)地用半峰寬W1/2來進行測定,如上圖中的峰j,很多數據系統的半峰寬值W1/2≡0.588W。用半峰寬來計算塔板數的等式為:

微信截圖_20220509160119.png

N也可以用這個等式表達:

微信截圖_20220509160125.png

式中,H=L/N是指色譜柱的理論塔板高度,H是每單位柱長上柱效的量度,它代表分離過程中的峰展寬,越小越好。因此,增加柱長(比如用一根250mm的色譜柱來替代一根150mm的色譜柱)就能很快速的增加N和改善分離效果(因為H對于體積不同的色譜柱來說是一個常數)。

從上面兩個等式,我們能看出,N值越大,色譜柱中的峰寬就越窄,分離效果就越好,柱效也就越高。那如何得到最窄的峰寬,最佳的柱效呢?

就要看范德姆特方程了,其等式如下:

微信截圖_20220509160130.png

式中,H表示理論塔板高度,v表示流動相的流速,A、B、C對于給定的溶質分子、色譜柱和一系列的實驗條件來說都是常數。

A代表渦流擴散項。由于樣品分子在各種填充顆粒之間以不同流速(箭頭)通過色譜柱,在流速較低(受限或者變窄)的液流里移動的分子會拖在后面,在流速較高(較寬)的液流里移動的分子則會被帶動跑到前方,這個影響譜帶加寬的因素與流動相的流速無關,僅取決于色譜柱里填充顆粒的排列方式。

微信截圖_20220509160138.png

渦流擴散(不依賴于流速)

怎么減小它呢?

可以選用粒徑更小、更均勻的顆粒填充色譜柱。

B/v代表縱向擴散項。溶質分子沿著色譜柱的縱向擴散,這個過程會導致帶寬隨著時間的增加而增大,無論流動相是否流動都會發生這種情況。

微信截圖_20220509160306.png

縱向擴散(時間依賴性)

怎么減小它呢?

可以提高流動相的流速v,選用較窄的柱子。

C*v代表傳質阻力項,包括流動相和固定相的溶質轉移。當流動相流速增加時譜帶加寬會變嚴重。

微信截圖_20220509160314.png

流動相溶質轉移(傳質,依賴于流速)

微信截圖_20220509160323.png

固定相溶質轉移(依賴于流速)

怎么減小它呢?

可以選用更小粒徑的填充填料,還可以降低流動相的流速。

通常來說,柱外效應對帶寬的影響可以忽略不計,但是也取決于設備特性和色譜柱的大小。以小顆粒填充的、體積較小的色譜柱特別會出現柱外譜帶加寬的問題。

從前面的描述可以看出,第一項A和流速無關,第二項B/v和第三項C*v與流速的關系正好相反。這就需要找到一個*速度,使總的H值最小。

微信截圖_20220509160331.png

在色譜柱確定,即A、B、C項確定的情況下,也可以通過計算來得到最佳流速值:

微信截圖_20220509160337.png

通過這個公式,可以計算出經典的4.6mm直徑,5μm粒徑的色譜柱,其最佳流速是1mL/min。

相信小伙伴們通過范德姆特方程能更加理解影響柱效的因素。


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