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蛋白質在組織或細胞中是以復雜的混合物形式存在，每種類型的細胞都含有上千種不同的蛋白質，至今還沒的單獨或一tao現成的方法能移把任何一種蛋白質從復雜的混合蛋白質中提取出來，因此往往采取幾種方法聯合使用。在這里小編就給各位小伙伴說道說道目前主流的蛋白質分離方法。

根據蛋白質溶解度不同的分離方法

（1）蛋白質的鹽析

不同蛋白質鹽析所需要的鹽飽和度不同，所以可通過調節鹽濃度將目的蛋白沉淀析出。被鹽析沉淀下來的蛋白質仍保持其天然性質，并能再度溶解而不變性。中性鹽(一般為硫酸銨、硫酸鎂、硫酸鈉、氯化鈉、磷酸鈉，其中應用z多的硫酸銨，它的優點是溫度系數小而溶解度大，也不易引起變性)對蛋白質的溶解度有顯著影響，一般在低鹽濃度下隨著鹽濃度升高，蛋白質的溶解度增加，此稱鹽溶；當鹽濃度繼續升高時，蛋白質的溶解度不同程度下降并先后析出，這種現象稱鹽析，將大量鹽加到蛋白質溶液中，高濃度的鹽離子（如硫酸銨的SO4和NH4)有很強的水化力，可奪取蛋白質分子的水化層，使之“失水”，于是蛋白質膠粒凝結并沉淀析出。

鹽析時若溶液pH在蛋白質等電點則效果更好。由于各種蛋白質分子顆粒大小、親水程度不同，故鹽析所需的鹽濃度也不一樣，因此調節混合蛋白質溶液中的中性鹽濃度可使各種蛋白質分段沉淀。

影響鹽析的因素有：

（a）溫度：除對溫度敏感的蛋白質在低溫（4度）操作外，一般可在室溫中進行。一般溫度低蛋白質溶解度降低。但有的蛋白質（如血紅蛋白、肌紅蛋白、清蛋白）在較高的溫度（25度）比0度時溶解度低，更容易鹽析。

（b）pH值：大多數蛋白質在等電點時在濃鹽溶液中的溶解度低。

（c）蛋白質濃度：蛋白質濃度高時，欲分離的蛋白質常常夾雜著其他蛋白質地一起沉淀出來（共沉現象）。因此在鹽析前血清要加等量生理鹽水稀釋，使蛋白質含量在2.5-3.0%。

蛋白質在用鹽析沉淀分離后，需要將蛋白質中的鹽除去，常用的辦法是透析，即把蛋白質溶液裝入秀析袋內（常用的是玻璃紙），用緩沖液進行透析，并不斷的更換緩沖液，因透析所需時間較長，所以在低溫中進行。此外也可用葡聚糖凝膠TandexG-25F或TandexG-50過柱的辦法除鹽，所用的時間就比較短。

（2）等電點沉淀法

蛋白質在靜電狀態時顆粒之間的靜電斥力小，因而溶解度也小，各種蛋白質的等電點有差別，可利用調節溶液的pH達到某一蛋白質的等電點使之沉淀，但此法很少單獨使用，可與鹽析法結合用。

（3）低溫有機溶劑沉淀法

用與水可混溶的有機溶劑，甲醇，乙醇或丙酮，可使多數蛋白質溶解度降低并析出，此法分辨力比鹽析高，但蛋白質較易變性，應在低溫下進行。

根據蛋白質分子大小的差別的分離方法

（1）透析與超濾

透析法是利用半透膜將分子大小不同的蛋白質分開。

超濾法是利用高壓力或離心力，強使水和其他小的溶質分子通過半透膜，而蛋白質留在膜上，可選擇不同孔徑的瀘膜截留不同分子量的蛋白質。

（2）凝膠過濾法

也稱分子排阻層析或分子篩層析，這是根據分子大小分離蛋白質混合物z有效的方法之一。柱中z常用的填充材料是葡聚糖凝膠（Tandex系列）瓊脂糖凝膠（Tanrose 系列）和瓊葡糖凝膠（SuperTandex pg系列）。

根據蛋白質帶電性質進行分離方法

（1）電泳法

各種蛋白質在同一pH條件下，因分子量和電荷數量不同而在電場中的遷移率不同而得以分開。值得重視的是等電聚焦電泳，這是利用一種兩性電解質作為載體，電泳時兩性電解質形成一個由正極到負極逐漸增加的pH梯度，當帶一定電荷的蛋白質在其中泳動時，到達各自等電點的pH位置就停止，此法可用于分析和制備各種蛋白質。

（2）離子交換層析法

離子交換劑有陽離子交換劑（如：SP Tanrose 6FF）和陰離子交換劑（Q Tanrose 6FF），當被分離的蛋白質溶液流經離子交換層析柱時，帶有與離子交換劑相反電荷的蛋白質被吸附在離子交換劑上，隨后用改變pH或離子強度辦法將吸附的蛋白質洗脫下來。

根據配體特異性的分離方法－親和層析法

親和層析法（Affinity chromatography）

分離蛋白質的一種極為有效的方法，根據某些蛋白質與另一種稱為配體(Ligand）的分子能特異而非共價地結合進行分離。它經常只需經過一步處理即可使某種待提純的蛋白質從很復雜的蛋白質混合物中分離出來，而且純度很高。