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信帆生物提供 Western Blotting檢測服務(wù)，全程提供技術(shù)指導(dǎo)，代測時(shí)間為兩周，歡迎！Western Blotting檢測,WB實(shí)驗(yàn)代測，WB實(shí)驗(yàn)服務(wù)

Western Blotting檢測,WB實(shí)驗(yàn)代測，WB實(shí)驗(yàn)服務(wù)

免疫印跡（immunoblotting）又稱蛋白質(zhì)印跡（Western blotting），它是根據(jù)抗原抗體的特異性結(jié)合檢

測復(fù)雜樣品中的某種蛋白的方法。該法是在凝膠電泳和固相免疫測定技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種新的免疫

生化技術(shù)。由于免疫印跡具有SDS-PAGE 的高分辨力和固相免疫測定的高特異性和敏感性，現(xiàn)已成為蛋白分

析的一種常規(guī)技術(shù)。免疫印跡常用于鑒定某種蛋白，并能對蛋白進(jìn)行定性和半定量分析。

凝膠遷移或電泳遷移率實(shí)驗(yàn)（EMSA-electrophoretic mobility shift assay）是一種研究DNA 結(jié)合蛋

白和其相關(guān)的DNA 結(jié)合序列相互作用的技術(shù)，可用于定性和定量分析。這一技術(shù)zui初用于研究DNA 結(jié)合蛋白，目前已用于研究RNA 結(jié)合蛋白和特定的RNA 序列的相互作用。

項(xiàng)目	市場價(jià)（元）	優(yōu)惠價(jià)（元）	說明
Western blot 檢測	1500元/膜	電訊元/膜	每張膜1--8樣本（一抗需確認(rèn)）
EMSA 800	2800元/膜	電訊元/膜	每張膜1--8樣本(探針及試劑需確認(rèn))

Western Blotting 技術(shù)服務(wù)

Western blot樣本要求

客戶需新鮮或正確保存的蛋白樣品，檢測目的蛋白的一抗（或由本公司代購）。樣品要求為：

1、裂解樣品總蛋白量>500ug/樣品。

2、細(xì)胞樣品總蛋白濃度>1mg/ml。

3、組織樣品總蛋白濃度>10-15mg/ml。

Western blot結(jié)果及數(shù)據(jù)提供

內(nèi)參蛋白和目的蛋白曝光膠片各一張，可提供掃描圖，實(shí)驗(yàn)報(bào)告，包括整個(gè)試驗(yàn)流程所涉及的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)和實(shí)驗(yàn)步驟。如需進(jìn)行蛋白純化服務(wù)，將提供檢測報(bào)告

服務(wù)內(nèi)容

我們提供從蛋白制備、蛋白電泳到Western blot檢測的全流程服務(wù)，如需要還可進(jìn)行灰度分析。

說明

1、建議提供目的蛋白陽性表達(dá)樣品（純蛋白或有陽性表達(dá)的細(xì)胞或組織）作為陽性對照。

2、每張膜檢測1-8個(gè)樣品。

3、如果一抗由客戶提供，請?jiān)谡_條件下保存，避免污染及反復(fù)凍融。

關(guān)于Western blot實(shí)驗(yàn)異常分析

『無信號』

原因	建議
一抗與二抗不匹配	選擇針對一抗來源種屬制備的二抗；
一抗不識別目的的種屬的蛋白	1)檢查抗體的說明書，適用范圍內(nèi)是否包含目的種屬 2)使用陽性對照來檢查抗體質(zhì)量
一抗或二抗不足，沒有足夠的抗體結(jié)合到目的蛋白	1)降低抗體稀釋倍數(shù)，增加抗體濃度 2)延長孵育時(shí)間
封閉劑與一抗有交叉反應(yīng)	改變封閉劑
抗原不足	1)每個(gè)泳道加入20-30ug總蛋白 2)制備樣品要使用蛋白酶抑制物及使用陽性對照
在檢測的組織內(nèi)目的蛋白表達(dá)水平低	檢測樣本不表達(dá)目的蛋白選擇表達(dá)量高的細(xì)胞作為陽性對照，用于確定檢測樣本是否為陰性，也可更換細(xì)胞系
蛋白轉(zhuǎn)膜效率低	1)利用麗春紅檢測轉(zhuǎn)膜效率;檢查轉(zhuǎn)移裝置是否電極弄反 2)轉(zhuǎn)移前膜是否用甲醇侵泡過
膜過渡洗滌	減少洗滌時(shí)間和強(qiáng)度
疊氮鈉抑制二抗活性	二抗稀釋液內(nèi)不用疊氮鈉

『沒有特異條帶』

原因	建議
細(xì)胞系傳代過多后蛋白表達(dá)譜發(fā)送變化	1)使用未傳代或傳代次數(shù)較少的細(xì)胞系進(jìn)行樣品制備
蛋白本身有很多修飾	1)查閱文獻(xiàn)，確定目的蛋白是否存在多種修飾
蛋白被消化或者降解	1)蛋白樣品確保未被污染，確保含有蛋白酶抑制劑
所檢測蛋白存在多種剪接體，導(dǎo)致分子量大小不同	1)查閱文獻(xiàn)或者通過搜索數(shù)據(jù)庫來確定該蛋白是否存在多種長度不同的編碼mRNA
一抗或二抗?jié)舛雀?/td>	1)減低抗體濃度
洗滌不夠	1)充分洗滌

『條帶大小不正確』

原因	建議
目的蛋白被降解	確保蛋白樣品未被污染，確保含有蛋白酶抑制劑
存在不同的剪接體	查閱文獻(xiàn)或者通過搜索數(shù)據(jù)庫來確定該蛋白是否存在多種長度不同的編碼mRNA
重組蛋白	檢測是否存在額外加入的蛋白
特殊蛋白如MDM2等	仔細(xì)閱讀抗體說明書

尊敬的客戶：

本公司有放射免疫技術(shù)服務(wù)、蛋白質(zhì)組學(xué)服務(wù)、免疫組化、PCR技術(shù)服務(wù)、生物信息學(xué)數(shù)據(jù)分析等，如果您想了解Western blot的更多內(nèi)容或者其他服務(wù)信息，您可以本公司的了解更多產(chǎn)品的詳細(xì)信息，至善至美的服務(wù)是我們永無止境的追求，歡迎新老客戶放心選購自己心儀產(chǎn)品，我們將竭誠為您服務(wù)！

所有產(chǎn)品僅供科研使用，不得用于食用，醫(yī)療等其它用途。