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5´-核苷酸酶(5´-NT)的測定試劑盒的注意點

時間:2023/12/7閱讀:489
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5′-核苷酸酶(5′-NT)的測定試劑盒的注意點

(比色法)

一、測定意義:

5′-核苷酸酶(5′-NT)廣泛分布于肝臟、膽道系統及各

種器官和組織中。血清中此酶活力增高(2~6)主要見于膽

道系統疾病,如阻塞性黃疸,原發性及繼發性肝癌等,且通

常與 ALP 的活力變化相平行。其增高機理是因高濃度的膽

鹽促使 5′-NT 從細胞膜上溶解出來,或膜通透性改變所致,

在骨骼系統的疾患如腫瘤轉移、畸形性骨炎、甲狀旁腺機能

亢進、佝僂病等,ALP 活力通常增高,而 5′-NT 仍為正常

或為臨界值。所以對 ALP 活力增高患者,測定此酶有助于

判斷 ALP 活力增高是膽道系統疾病還是骨骼系統疾病引

起。此外,妊娠婦女及兒童期 5′-NT 不增高,但 ALP 均升

高。

二、測定原理

5′-核苷酸酶(5′-NT)催化腺苷-5′-磷酸水解,生成腺

苷和無機磷。測定產物無機磷的含量,代表 5′-NT 活力。可

以用抑制劑去除其他酶的影響。

三、試劑組成與配制:(100T/48 樣)

試劑一:液體 80mL×1 瓶,4℃冷藏 6 個月;過飽和溶液,

會有針狀結晶析出,取上清使用。

試劑二:液體 12mL×1 瓶,4℃冷藏 6 個月。

試劑三:液體 6mL×1 瓶。4℃冷藏 6 個月。

試劑四:粉劑 2 支,稀釋液 6mL×2 支,4℃冷藏 1 年。臨用

時將1支粉劑倒入1支稀釋液中,混勻溶解(現

用現配),配好后 4℃可保存二周。

試劑五:液體 60mL×2 瓶,該試劑有腐蝕性,盡量不要碰到

皮膚上,4℃保存 1 年。

試劑六:液體 50mL×1 瓶,該試劑有腐蝕性,盡量不要碰到

皮膚上,室溫或 4℃保存 1 年。

試劑七:粉劑×1瓶,

4℃保存1年;臨用前每瓶加雙蒸水40mL

溶解,現用現配,配好后 4℃避光可保存一周;

試劑八:粉劑×1 瓶,4℃保存 1 年;每瓶加雙蒸水 50mL 溶

解,溶解后 4℃保存 3 個月;

工作液一的配制按試劑一:試劑二:試劑四=7:1:1 的比例

配制,現用現配。根據您的樣本數,放寬 1-2 個

樣本的量,需多少配多少。

工作液二的配制按試劑一:試劑二:試劑三:試劑四=6:1:1:1

的比例配制,現用現配。根據您的樣本數,放寬

1-2 個樣本的量,需多少配多少。

定磷劑的配制:按雙蒸水:試劑六:試劑七:試劑八=2:1:1:1

比例,先后順序配制,現用現配,好后 4℃避光可保

存 48 小時。(配試劑所用器皿以及雙蒸水,一定

嚴格防止磷污染)

試劑九:6mmol/L 磷標準貯備液 5mL×1 瓶,4℃冷藏 6 個月;

0.06mmol/L 磷標準應用液的配制:取 6mmol/L 磷標準貯備

液 0.05mL 用試劑五稀釋至 5mL 即(100 倍稀釋),

現用現配,配好后可保存 48 小時。

 

六、注意點:

1、血漿可能會出現混濁,如有混濁可 3500 轉/分離心 10 分鐘

取上清進行檢測。與金屬螯合的抗凝劑會干擾反應。肝素

抗凝不會影響。

2、如樣本中酶活性偏低,可將酶促反應時間延長至 60 分鐘,

亦可(計算公式相應改變)。

3、所用器皿嚴防磷污染,測試所用試管要求嚴格,要沒有一

點磷,若試管放過磷酸或磷酸鹽緩沖液,一定要洗得非常

干凈,要先用清潔劑加水煮,再用自來水沖,最后用蒸餾

水沖干凈。最好用一次性塑料試管(本所有售),避免磷污

染是檢測成敗的關鍵。

附錄Ⅰ :組織中 5′-NT 測定

一、樣本前處理:

準確稱取組織重量,按重量(g):體積(mL)=1:9

的比例,加入 9 倍體積的生理鹽水,冰水浴條件機械勻漿,

2500 轉/分,離心 10 分鐘,取上清液進行測定。

[]:不可用含磷的試劑作為勻漿介質(例如 PBS),建

議用生理鹽水。

附錄Ⅱ:血清(漿)5'-NT 測定

一、樣本前處理:血清(漿)直接取樣進行檢測。

5′-核苷酸酶(5′-NT)的測定試劑盒的注意點


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