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南京信帆生物技術有限公司
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膠原酶NB4/Collagenase NB 4使用詳情

時間:2022/11/28閱讀:1225
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膠原酶NB4/Collagenase NB 4使用詳情

 

 

產品描述

膠原酶(CollagenaseCAS NO. 9001-12-1)是一種蛋白水解酶,常用來消化細胞外基質蛋白。作為一種肽鏈內切酶,膠原酶特異性識別Pro-X-Gly-Pro序列(高頻出現在膠原蛋白,很少在其他蛋白中發現)并切割氨基酸(X)和甘氨酸(Gly)之間的肽鍵。不同于其他蛋白酶,膠原酶是唯-一一種可識別并降解具三股超螺旋結構的天然膠原纖維,這種膠原纖維廣泛存在結締組織中。

膠原酶NB4標準級別(Collagenase NB 4 Standard Grade),來源于溶組織梭菌(Clostridium histolyticum),是一種粗制的膠原酶,含有膠原溶解酶和其他酶活性包括梭菌蛋白酶和中性蛋白酶,這些酶比例的平衡確保溫和和有效的組織消化。本品膠原酶活性≥0.10 U/mgPZ),適用于人和動物組織各種細胞的分離,組織類型包括:脂肪組織、軟骨、皮膚、胎盤、臍帶組織和肺,還適用于細胞傳代培養,比如胚胎干細胞。

 

保存與運輸方法

保存:2-8℃干燥保存,至少1年有效。

運輸:冰袋運輸。

 

使用方法

一、儲存液制備

膠原酶NB4標準級別溶于所有緩沖液(通常用于細胞分離)的濃度高達150mg/ml。酶溶液需連續放在冰上。由于膠原酶和一些二級蛋白酶依賴于Ca2+,因此建議在緩沖液內加入≥2mM Ca2+,且完-全不能含鈣離子螯合劑(比如EDTA)。

重溶的膠原酶NB4溶液需經0.22μm濾膜過濾除菌,按照單次用量分裝,并置于-20℃凍存。如果避免反復凍融,可穩定保存1年。注意經0.22μm濾膜建議選擇具低蛋白結合特性的膜(比如,醋酸纖維素,PVDF,或PES)。

二、工作液制備

用緩沖液稀釋儲存液到需要的膠原酶濃度,工作液需一直保存在冰上直到使用。

三、組織消化

對以下應用的建議起始濃度:脂肪組織(人或鼠類)—0.2-0.3 PZ U/ml;軟骨(人或鼠類)—0.3-0.4 PZ U/ml;總的來說,具體膠原酶濃度取決于組織類型、來源和分離步驟。本膠原酶的最佳條件為37℃,pH 7.4

四、失活和抑制劑

比如,通過降低反應溫度或稀釋酶溶液能夠減低消化水平。

pH能可逆失活膠原酶活性,低pH不可逆失活膠原酶活性。抑制劑包括半胱氨酸或螯合劑如EDTA

 

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