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D-熒光素鉀鹽是螢火蟲熒光素酶底物

時間:2022/6/9閱讀:986
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D-熒光素鉀鹽是螢火蟲熒光素酶底物


D-熒光素( D-Luciferin)是螢火蟲熒光素酶底物,其量子效率為 0.88,是魯米諾(Luminol)的 20 倍。D-熒光素(D-Luciferin)是熒光素酶 (Luciferase)的常用底物,普遍應用于整個生物技術領域,特別是體內活體成像技術。其作用機制是在 ATP 和熒光素酶的作用下,熒光素(底 物)能夠被氧化發光。當熒光素過量時,產生的光量子數與熒光素酶的濃度呈正相關性。將攜帶熒光素酶編碼基因(Luc)的質粒轉染入細胞 后,導入研究動物如大、小鼠體內,之后注入熒光素,通過生物發光成像技術(BLI)來檢測光強度變化,從而實時監測疾病發展狀態或藥物 的治療功效等。也可以利用 ATP 對此反應體系的影響,根據生物發光強度的變化來指示能量或生命體征。D-熒光素也常用于體外研究,包括 熒光素酶和 ATP 水平分析;報告基因分析;高通量測序和各種污染檢測。 

使用方法

1. 活體成像分析方法 


A:用 DPBS(w/o Mg2+、Ca2+)配置 D-Luciferin 工作液(15mg/mL),0.2 μm 濾膜 無菌過濾。立即使用,或 分裝-20℃保存。 


B:注射量:10μL/g 的體重,如 10g 重小鼠,注射 100μL 工作液(1.5mg D-Luciferin)。 


C:腹腔注射 10~15 分鐘后,上機進行圖像分析。


 *建議對每只動物模型都需要建立熒光素酶動力曲線,從而確定高信號檢測時間和信號平臺期。


2. 體外分析方法 A:用無菌水配置 200×的 D-Luciferin 儲備液(30mg/mL),立即使用,或分裝-20℃保存。 


B:用預熱好的*培養基稀釋 D-Luciferin 儲備液,配置工作液(150μg/mL)。 


C:去除培養細胞的培養基。 


D:進行圖像分析前,向細胞內添加熒光素工作液,37℃孵育 5-10 min,進行圖像分析。 


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