多酚氧化酶試劑盒正確使用！

黃至暗褐色粉末或液體。編號(hào)：EC 1.10.3.1。催化鄰苯二酚氧化成鄰苯二醌，也能作用于單酚單加氧酶的底物   。淡黃至暗褐色粉末或液體。溶于水，不溶于乙醇。有吸濕性。相對(duì)分子質(zhì)量約為125000，適pH為6.5，適溫度為2℃

PPO（EC1.10.3.1）主要存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，是一種含銅的氧化酶，能使一元酚和二元酚氧化產(chǎn)生醌，從而引起褐化，與果蔬加工、茶葉品質(zhì)和組培等密切相關(guān)。

酶蛋白具有一般蛋白質(zhì)的特性，在高溫或低溫條件下有易變性失活的特點(diǎn)。各類酶均有其活性的適溫度范圍，一般在30C～50℃范圍內(nèi)酶活性*。酶若失活、變性，則就喪失了催化能力。酶的催化作用具有專一性，如多酚氧化酶，只能使茶多酚物質(zhì)氧化，聚合成茶多酚的氧化產(chǎn)物茶黃素、茶紅素和茶褐素等；蛋白酶只能促使蛋白質(zhì)分解為氨基酸。茶葉加工就是利用酶具有的這種特性，用技術(shù)手段鈍化或激發(fā)酶的活性，使其沿著茶類所需的要求發(fā)生酶促反應(yīng)而獲得各類茶*的色香味。如綠茶加工過(guò)程中的殺青就是利用高溫鈍化酶的活性，在短時(shí)間內(nèi)制止由酶引起的一系列化學(xué)變化，形成綠葉綠湯的品質(zhì)特點(diǎn)。紅茶加工過(guò)程中的發(fā)酵就是激化酶的活性，促使茶多酚物質(zhì)在多酚氧化酶的催化下發(fā)生氧化聚合反應(yīng)，生成茶黃素、茶紅素等氧化產(chǎn)物，形成紅茶紅葉紅湯的品質(zhì)特點(diǎn)。

實(shí)驗(yàn)所需儀器：

可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。

粗酶液提取：

1、收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照每500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（功率20％，超聲3秒，間隔10秒，重復(fù)30次）；8000g 4℃離心10分鐘，取上清，置冰上待測(cè)。

2、稱取約0.1g組織，加入1mL提取液進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10分鐘，取上清，置冰上待測(cè)。

測(cè)定步驟：

1、分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至525nm，蒸餾水調(diào)零。

2、樣本測(cè)定（在EP管中依次加入下列試劑）

37℃(哺乳動(dòng)物)或25℃（其它物種）中準(zhǔn)確水浴10min后，迅速放入冰浴中冷卻

充分混勻，5000g，常溫離心10min，收集上清，取200μL至微量石英比色皿或96孔板中，525nm處檢測(cè)測(cè)定管和對(duì)照管吸光度，計(jì)算ΔA=A測(cè)定-A對(duì)照。

本產(chǎn)品只供科研實(shí)驗(yàn)用，不做其它用途！