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AC04L505-EZ Trans慢病毒包裝試劑盒
  • AC04L505-EZ Trans慢病毒包裝試劑盒
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貨物所在地:上海上海市

更新時間:2024-09-05 14:38:51

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和元李記EZ Trans慢病毒包裝試劑盒(EZ Trans Lentiviral Packaging Kit)包含:慢病毒包裝質(zhì)粒、對照質(zhì)粒、轉(zhuǎn)染試劑(EZ Trans Regent)等三個組份。和元李記慢病毒包裝試劑盒,提供足量、優(yōu)質(zhì)的對照質(zhì)粒和包裝質(zhì)粒,省去實(shí)驗(yàn)人員抽提質(zhì)粒的工作。

EZ Trans慢病毒包裝試劑盒

產(chǎn)品描述

和元李記EZ Trans慢病毒包裝試劑盒EZ Trans Lentiviral Packaging Kit)包含:慢病毒包裝質(zhì)粒、對照質(zhì)粒、轉(zhuǎn)染試劑(EZ Trans Regent)等三個組份。和元李記慢病毒包裝試劑盒,提供足量、優(yōu)質(zhì)的對照質(zhì)粒和包裝質(zhì)粒,省去實(shí)驗(yàn)人員抽提質(zhì)粒的工作。

和元李記慢病毒載體表達(dá)系統(tǒng)由pLenti慢病毒載體和Lentiviral Mix質(zhì)粒組成。pLenti慢載體中含有HIV基本元件5LTR3LTR以及WPRE等其他輔助元件,表達(dá)框?yàn)?span>U6-shRNA(NC)-CMV-EGFP-2A-Puro,含綠色熒光和puro真核抗性。客戶可以根據(jù)不同的實(shí)驗(yàn)?zāi)康尼槍?span>plenti載體改造用于啟動子、基因功能功能研究,穩(wěn)定株篩選等。Lentiviral Mix能夠表達(dá)病毒包裝需要的各種必需原件,可以兼容第二代和第三代的慢病毒包裝系統(tǒng)。

訂購信息

產(chǎn)品名稱

貨號

規(guī)格

EZ Trans  慢病毒包裝試劑盒

AC04L505

5T

EZ Trans  慢病毒包裝試劑盒

AC04L510

10T

EZ Trans  慢病毒包裝試劑盒

AC04L520

20T

產(chǎn)品組分

貨號

規(guī)格

組分

A對照質(zhì)粒

B包裝質(zhì)粒

C轉(zhuǎn)染試劑

AC04L505

5T

16μg

110μg

450μL

AC04L510

10T

32μg

220μg

900μL

AC04L520

20T

64μg

330μg

1800μL

運(yùn)輸與保存

藍(lán)冰運(yùn)輸。AB組分-20℃保存,C組分4℃保存,有效期12個月。

使用方法

10 cm培養(yǎng)皿為例(1皿為1T

1.        細(xì)胞準(zhǔn)備:293T細(xì)胞按照6×105cells/mL的細(xì)胞密度傳代到10cm培養(yǎng)皿中,第二天細(xì)胞長到80%-85%時準(zhǔn)備轉(zhuǎn)染。

2.        轉(zhuǎn)染前換液:轉(zhuǎn)染前1h將需要轉(zhuǎn)染的細(xì)胞更換新鮮的DMEM10mL/皿。

3.        轉(zhuǎn)染:

1)        1.5mL EP管記為質(zhì)粒混合液(A),加入500uL DMEM16μg質(zhì)粒DNA(可自行改造)和22μg包裝質(zhì)粒,振蕩混勻;

2)        另取1.5mL EP管記為轉(zhuǎn)染試劑混合液(管B),加入500uL DMEM90μL 轉(zhuǎn)染試劑,振蕩混勻。

3)        再將管B緩慢加入到管A中,輕輕混勻,靜置8min形成復(fù)合物,后將混合液均勻滴加到提前換好液的10cm培養(yǎng)皿中,輕輕混勻,放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)

A

DMEM

500μL

DNA

16μg

包裝質(zhì)粒

22μg

B

DMEM

500μL

轉(zhuǎn)染試劑

90μL

4.        轉(zhuǎn)染后換液:轉(zhuǎn)染后6-8h,將培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)基吸掉,棄于廢液杯中,然后加入10mL 培養(yǎng)基(含有血清和抗生素)繼續(xù)培養(yǎng)。

5.        病毒收集:轉(zhuǎn)染48h后,吸取上清液于50mL 離心管中,4000rpm離心10min, 4,將上清液用0.45um過濾器過濾轉(zhuǎn)移到新的50mL 離心管中。此時上清液中的病毒顆粒可以直接去檢測滴度或者感染目的細(xì)胞,如果對病毒的滴度及純度有較高要求,可進(jìn)行后續(xù)操作。

6.        病毒濃縮(可選):每10mL 病毒上清液加入2.5mL EZ慢病毒濃縮液(CAT:AC04L442,混勻,4放置2h4000rpm離心30min,吸棄上清。

7.        病毒分裝及保存(可選):吸取EZ慢病毒凍存液(CAT:AC04L4531mL重懸上述病毒濃縮沉淀,輕輕混勻后-80℃保存。病毒溶液可分裝保存,避免反復(fù)凍融。

注意事項(xiàng)

1.      本產(chǎn)品僅限于科學(xué)實(shí)驗(yàn)研究使用,不得用于臨床診斷、治療等領(lǐng)域。

2.      所有慢病毒操作均應(yīng)盡量在BSL2*生物安全柜中進(jìn)行,并佩戴一次性醫(yī)*口罩和手套。

3.      病毒切忌反復(fù)凍融,凍融一次病毒滴度降低10%-20%左右。

4.      病毒儲存6個月后,建議在使用前重新測定病毒滴度。

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