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AC04L051-EZ Trans siRNA轉(zhuǎn)染試劑
  • AC04L051-EZ Trans siRNA轉(zhuǎn)染試劑
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貨物所在地:上海上海市

更新時間:2024-11-21 17:13:52

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EZ Trans siRNA轉(zhuǎn)染試劑,是一種基于陽離子高分子聚合物開發(fā)的新型轉(zhuǎn)染試劑,適用于siRNA 及microRNA (miRNA) 的轉(zhuǎn)染。

產(chǎn)品描述

EZ Trans siRNA轉(zhuǎn)染試劑,是一種基于陽離子高分子聚合物開發(fā)的新型轉(zhuǎn)染試劑,適用于siRNA 及microRNA (miRNA) 的轉(zhuǎn)染。本產(chǎn)品能在多種常見細胞中實現(xiàn)高效率、低毒性的轉(zhuǎn)染效果,且具有操作簡便,重復性佳等優(yōu)點,適用于 siRNA或miRNA 介導的基因抑制實驗。

訂購信息

產(chǎn)品名稱

貨號

規(guī)格

EZ Trans siRNA轉(zhuǎn)染試劑

AC04L051

300 uL

EZ Trans siRNA轉(zhuǎn)染試劑

AC04L052

1 mL

運輸與保存

藍冰運輸。4℃保存,有效期 6個月;-30℃至-10℃保存,有效期12個月。注:避免反復凍融。

使用方法(以 24 孔板為例,其他培養(yǎng)皿中轉(zhuǎn)染請參考表 1)

1. 接種細胞

對于貼壁細胞:轉(zhuǎn)染前一天,將細胞按照每孔1-2x10^5個細胞的量進行鋪板,使其在轉(zhuǎn)染時密度為60%-80% 為佳。

對于懸浮細胞:轉(zhuǎn)染當天,配制轉(zhuǎn)染試劑-核酸復合物之前,用PBS清洗細胞1-2次,用250 μL Opti-MEM I 減血清培養(yǎng)基 (無血清) 重懸細胞,在24孔板中進行細胞鋪板,細胞密度為60-80%。

2. 準備轉(zhuǎn)染試劑-siRNA復合物(或轉(zhuǎn)染試劑-miRNA復合物)

(1)  對于每孔細胞,取2 μLsiRNA (20 μM,DEPC水溶解)加入到1.5mL離心管中,加入2 μL轉(zhuǎn)染試劑與siRNA 混合,室溫孵育3 min。

(2)  往上述混合物中加入100 μL Opti-MEM I減血清培養(yǎng)基(無血清),輕輕混勻,在室溫下靜置30 min,形成轉(zhuǎn)染試劑-核酸復合物。

(3)  30 min后,往上述復合物中加入250 μLOpti-MEM I減血清培養(yǎng)基(無血清),輕輕混勻。

3. 轉(zhuǎn)染細胞

(1) 細胞用 PBS 清洗 1-2 次,將上述 350µL 轉(zhuǎn)染試劑-siRNA 復合物加入每孔細胞。可在轉(zhuǎn)染 6h 后換液或者補充 150μL 培養(yǎng)基 (含血清),總體積達到 500μL,即達到常規(guī)的培養(yǎng)皿使用培養(yǎng)液的量。

(2) 在 37℃,5% CO2 培養(yǎng)箱培養(yǎng) 24-48 h,之后即可檢測基因干擾效果或者后續(xù)功能實驗。

注意事項

1、本產(chǎn)品僅限于科學實驗研究使用,不得用于臨床診斷、治療等領域。

2、小 RNA(siRNA/miRNA)質(zhì)量:請務必使用高純度無內(nèi)毒素轉(zhuǎn)染級 RNA。

3、整個實驗過程使用無 RNA 酶和無熱原性的材料,如離心管、槍頭、緩沖液。

4、細胞條件:細胞狀態(tài)會極大影響轉(zhuǎn)染效率,待轉(zhuǎn)染細胞應處于良好生長狀態(tài),建議使用生長處于指數(shù)期、存活率大于 90% 的細胞進行轉(zhuǎn)染。如果細胞是近期復蘇的液氮凍存細胞,請在轉(zhuǎn)染前至少傳代兩次。

5、siRNA 與轉(zhuǎn)染試劑使用比例:對于大多數(shù)細胞系,轉(zhuǎn)染復合物中siRNA (20 μM Stock)與轉(zhuǎn)染試劑的比例在1:1 至1:3 之間,推薦比例為1:2。想要獲得優(yōu)的基因干擾結(jié)果,需要對這一比例進行優(yōu)化。

6、由于某些特殊培養(yǎng)基中的成分可能會抑制陽離子聚合物介導的轉(zhuǎn)染,因此建議測試這些培養(yǎng)基與本產(chǎn)品的相容性,以確保最佳轉(zhuǎn)染效果。

7、細胞類型、基因特性、siRNA/miRNA 的效力、靶 mRNA 的半衰期和靶蛋白的周轉(zhuǎn)率等因素都會影響siRNA/miRNA 介導的基因敲低效果。

8、建議 siRNA/miRNA 工作濃度在 10-100nM 之間,轉(zhuǎn)染試劑的體積應根據(jù) siRNA/miRNA 濃度和培養(yǎng)皿的大小進行調(diào)整,請參見表 1。

表 1:不同培養(yǎng)體積對應的待轉(zhuǎn)siRNA/miRNA、 EZ Trans、稀釋液用量

培養(yǎng)器皿

培養(yǎng)液體積

(mL)

RNA (20 μM )

(μL)

轉(zhuǎn)染試劑

(μL)

Opti-MEM   I培養(yǎng)基a

(μL)

Opti-MEM   I培養(yǎng)基b

(μL)

96 孔板

0.1

0.2

0.4

20

50

24 孔板

0.5

1

2

100

250

12 孔板

1

2

4

200

500

6 孔板

2

4

8

400

1000

60 mm 培養(yǎng)皿

4

8

16

800

2000

100 mm 培養(yǎng)皿

10

20

40

2000

5000

注:該表使用量僅供參考,具體使用量還需根據(jù)細胞類型及其他實驗條件進行優(yōu)化。a: 稀釋轉(zhuǎn)染試劑-RNA復合物所需培養(yǎng)基的量;b: 加入轉(zhuǎn)染試劑-RNA復合物的培養(yǎng)基的量。

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