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產品描述
細胞周期與細胞凋亡檢測試劑盒(Cell Cycle and Apoptosis Analysis Kit)是一種采用經典的碘化丙啶染色(Propidium staining，即 PI staining)方法進行細胞周期與細胞凋亡分析的檢測試劑盒。
碘化丙啶(Propidium，簡稱 PI)是一種雙鏈 DNA 的熒光染料。碘化丙啶和雙鏈 DNA 結合后可以產生熒光，并且熒光強度和雙鏈 DNA 的含量成正比。細胞內的 DNA 被碘化丙啶染色后，可以用流式細胞儀對細胞進行 DNA 含量測定，然后根據 DNA 含量的分布情況，可以進行細胞周期和細胞凋亡分析。
碘化丙啶染色后，假設 G0/G1 期細胞的熒光強度為 1， 那么含有雙份基因組 DNA 的 G2/M 期細胞的熒光強度的理論值為 2，正在進行 DNA 復制的 S 期細胞的熒光強度為 1-2 之間。凋亡細胞由于細胞核發生濃縮以及發生 DNA fragmentation 導致部分基因組 DNA fragmentation 在染色過程中丟失，因此凋亡細胞碘化丙啶染色后呈現明顯的弱染，即熒光強度小于 1，在流式檢測的熒光圖上出現所謂的 sub-G1 峰，即凋亡細胞峰。
細胞發生凋亡時，由于胞漿和染色質濃縮、核碎裂， 產生凋亡小體，使細胞的光散射性質發生變化。在細胞凋亡的早期，細胞對前向角光散射的能力顯著降低，對側向光散射的能力增加或沒有變化。在細胞凋亡的晚期，前向和側向光散射的信號均降低。因此可通過流式細胞儀測定細胞光散射的變化觀察細胞凋亡情況。
本試劑盒通常應用于培養的貼壁或懸浮細胞的細胞周期與細胞凋亡檢測。如果用于組織的細胞周期與細胞凋亡檢測，則必須把組織消化成單細胞狀態，才可以進行檢測。
訂購信息
產品名稱 | 貨號 | 規格 |
Cell Cycle and Apoptosis Kit(細胞周期檢測試劑盒) | AC12L543 | 50T |
Cell Cycle and Apoptosis Kit(細胞周期檢測試劑盒) | AC12L544 | 100T |
產品組分
組分 | 50T | 100T |
A.染色緩沖液 | 25 mL | 50 mL |
B. 碘化丙啶染色液 (20×) | 1.25 mL | 1.25mL*2 |
C. RNase A (50×) | 0.5 mL | 1 m |
保存方法
冰袋運輸，-20℃保存，有效期見外包裝。碘化丙啶染色液（20×）需避光保存。
使用方法
1.細胞樣品的準備：
對于貼壁細胞：
（1）首先小心收集細胞培養液到離心管內備用。
（2）用胰酶消化細胞，至細胞可以被輕輕用移液管或槍頭吹打下來時，加入前面收集的細胞培養液，吹打下所有的貼壁細胞，并輕輕吹散細胞。
（3）再次收集到離心管內，用1000 g 左右離心 3-5 min，沉淀細胞。
注：對于特定的細胞，如果細胞沉淀不充分，可以適當延長離心時間或稍稍加大離心力。
（4）小心吸除上清，可以殘留約 50 μL 左右的培養液，以避免吸走細胞。加入約 1 mL 冰浴預冷的 PBS，重懸細胞，并轉移到 1.5 mL 離心管內。再次離心沉淀細胞，小心吸除上清，可以殘留約 50 μL 左右的 PBS，以避免吸走細胞。輕輕彈擊離心管底以適當分散細胞，避免細胞成團。
對于懸浮細胞：
（1）用1000 g 左右離心 3-5 min，沉淀細胞。注：對于特定的細胞，如果細胞沉淀不充分，可以適當延長離心時間或稍稍加大離心力。
（2）小心吸除上清，可以殘留約 50 μL 左右的培養液，以避免吸走細胞。加入約 1 mL 冰浴預冷的 PBS，重懸細胞，并轉移到 1.5 mL 離心管內。再次離心沉淀細胞，小心吸除上清，可以殘留約 50 μL 左右的 PBS，以避免吸走細胞。輕輕彈擊離心管底以適當分散細胞，避免細胞成團。
2.細胞固定：
（1）加入 1 mL 冰浴預冷 75-80%乙醇，輕輕吹打混勻，對于易成團的細胞，要一邊加入乙醇一邊震蕩混勻。如果細胞株本身極易成團，可以先將細胞充分重懸在250 μL 的 PBS 中，一邊逐滴加入 750 μL 的無水乙醇。乙醇終濃度控制在 75%左右即可，PBS 體積及無水乙醇體積可按比例調整。注：切記是先重懸在 PBS 中，不能重懸在培養基中再加無水乙醇！
（2）將 75-80%的乙醇重懸的樣品置于-20oC，固定過夜。（如著急檢測，-20℃ 固定 1-2 h 也可以進行檢測；乙醇固定的樣品可以在-20℃保存1個月）
（3）1000 g 左右離心 3-5 min， 沉淀細胞。注：對于特定的細胞，如果細胞沉淀不充分，可以適當延長離心時間或稍稍加大離心力。
（4）小心吸除上清，可以殘留約 50 μL 左右的 75-80%乙醇，以避免吸走細胞。加入約 1 mL 冰浴預冷的 PBS，重懸細胞。再次離心沉淀細胞，盡可能將上清去除干凈。
3.碘化丙啶染色液的配制：
參考下表，根據待檢測樣品的數量配制適量的碘化丙啶染色液：
| 內容 | 一個樣品 | 6 個樣品 | 12 個樣品 |
| 染色緩沖液 | 0.5 mL | 3 mL | 6 mL |
| 碘化丙啶染色液(20×) | 25μL | 150 μL | 300 μL |
| RNase A (50×) | 10 μL | 60 μL | 120 μL |
| 終體積 | 0.535 mL | 3.21 mL | 6.42 mL |
【注】：配制好的碘化丙啶染色液短時間內可以 4oC 保存，宜當日使用。
4.染色：
（1）每管細胞樣品中加入 0.5 mL 碘化丙啶染色液， 緩慢并充分重懸細胞沉淀，室溫避光孵育 15-30 min。（2）隨后可以 4oC 或冰浴避光存放，染色完成后宜在 24 小時內完成流式檢測（建議能在當日完成流式檢測）。
5.流式檢測和分析：
用流式細胞儀在 535 nm 激發波長， 615 nm 發射波長的通道檢測紅色熒光，同時檢測光散射情況。采用適當分析軟件進行細胞 DNA 含量分析和光散射分析。
注意事項：
1.熒光染料均存在淬滅問題，保存和使用過程中請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。
2.碘化丙啶對人體有刺激性，請注意適當防護。
3.為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
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