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和元李記(上海)生物技術(shù)...

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LyGreen (20×in water) HRM染料 使用說明書

閱讀:1432      發(fā)布時間:2017-11-14
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LyGreen (20×in water) HRM染料(20×水溶液)

產(chǎn)品名稱貨號規(guī)格保存價格(元)

LyGreen (20×in water) HRM染料(20×水溶液)

D1201L2221

1ml

4℃

450.00

 

產(chǎn)品描述

LyGreen™核酸染料是一種新型的的雙鏈DNA結(jié)合飽和熒光染料,是新一代用于HRM分析的熒光染料,也可用于實時定量PCR(qPCR)。該染料結(jié)構(gòu)上由兩個單體染料分子通過一個彈性臂連接成一個二聚體,在沒有DNA存在時,該結(jié)構(gòu)呈無熒光環(huán)狀結(jié)構(gòu),一旦有DNA出現(xiàn),則恢復(fù)隨機形態(tài)并與DNA結(jié)合發(fā)出強烈的綠色熒光。

與市場上其他熒光染料如SYBR Green I 相比,LyGreen具有如下突出優(yōu)點:1)高靈敏度:在推薦濃度下使用時可以獲得比SYBR Green I 更強的信號。2)準確:結(jié)合雙鏈DNA,變形時染料不遷移,熒光信號準確反映雙鏈DNA變化情況;過量染料形成二聚體,而不游離,使得LyGreen對PCR的抑制遠小于SYBR Green I,因此,使用LyGreen進行的qPCR實驗可以使用快速PCR步驟。3)高穩(wěn)定性:在正常的儲存、操作和PCR過程中不會被破壞。在緩沖溶液中的染料可以安全的儲存在室溫或冰箱里,也可以反復(fù)凍融。4)安全性好:細胞膜穿透性測試表明,LyGreen幾乎不能穿透細胞膜,安全性高。5)兼容性:和SYBR Green I 光譜相似,使用不同品牌qPCR儀器時不許改變光譜元件設(shè)置,也無需改變操作步驟,qPCR完成后,無需加入其它核酸染料便能直接在凝膠成像系統(tǒng)下觀察分析。6)重復(fù)性好(如圖1.):特殊設(shè)計染料,相同反應(yīng)體系下,熒光信號釋放僅與雙鏈濃度有關(guān),線性。

此外,LyGreen在做HRM分析時,相同反應(yīng)條件下,熒光信號穩(wěn)定而持久,重現(xiàn)性好。在微流PCR,恒溫擴增,毛細管電泳,DNA定量以及細胞活力鑒定等領(lǐng)域也具有的表現(xiàn)。本品以20×LyGreen水溶液形式提供(CAT#: D1003L5000 或D1003L5001)。另外,我公司也提供LyGreen HRM分析試劑盒(CAT#: D1101L1130),僅需添加引物和模板,可以體現(xiàn)LyGreen染料優(yōu)點。

應(yīng)用實例

 

圖1. LyGreen染料用于綿羊FecB基因HRM分析.

HRM分析設(shè)備為LightCycler@480熒光定量PCR儀(德國羅氏)

運輸與保存方法

冰袋運輸。4 ºC干燥避光保存,保質(zhì)期12個月。

注意事項

1)做qPCR時注意設(shè)置陽性和陰性對照。

2)為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。

 光學(xué)性質(zhì)

激發(fā)波長= 497 nm

發(fā)射波長= 520nm

 實驗方法

PCR反應(yīng)的配制(50uL)

 

試劑

用量

ddH2O

計算加水量,按終體積50µl, 

Taq DNA poLymerase

5U

2mM的 dNTP

5 uL

50mM MgCl2

2.5uL

20 X LyGreen

2.5uL

引物

0.1-1 uM(終濃度)


注意事項

 

1)  請根據(jù)不同的儀器類型,不加入或加入合適濃度的參比染料ROX。該體系需根據(jù)所使用的Taq酶的不同進行適當優(yōu)化;

2)根據(jù)實驗用量于冰上向無菌離心管中依次加入水,Taq poLymerase buffer, dNTPs, MgCl2, LyGreen, Taq poLymerase, and primers等配制qPCR反應(yīng)體系(1×Master mix);

3)將1×Master mix 適量分裝至無菌PCR管中,并加入DNA (50 ng/反應(yīng));

4)按照儀器類型選擇合適的擴增程序。

提供商

和元李記(上海)生物技術(shù)有限公司

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352.7KB

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