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飼料中喹乙醇的測定解決方案
前言:
喹乙醇又稱喹酰胺醇,商品名為倍育諾、快育靈,是一種化學合成的生長促進劑,也屬于廣譜抗菌藥物。可促進機體蛋白質合成代謝,提高飼料能量利用率,從而加快生長發育,提高了個體瘦肉率。同時喹乙醇對革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌均具有明顯抗菌效果,又不影響有益的腸道微生物菌落,因此對預防和控制豬腹瀉病作用顯著。
但是喹乙醇有中度至明顯的蓄積毒性,對大多數動物有明顯的致畸作用,對人也有潛在的三致性,即致畸形,致突變,致癌。因此,喹乙醇在美國和歐盟都被禁止用作飼料添加劑。我國農業部早在2001年第168號公告中就作了嚴格規定:喹乙醇只能用于體重低于35千克的豬,添加量為50-100ppm的飼料,禁止用于家禽及水產養殖。
盡管如此,為了謀取暴利,仍然有不法分子在飼料中超標添加喹乙醇,從而導致喹乙醇在食用肉中殘留,食品安全得不到應有的保證。
大連依利特分析儀器有限公司,結合GB/T 8381.7-2009《飼料中喹乙醇的測定液相色譜法》,對飼料中喹乙醇進行了分析檢測,提出了喹乙醇檢測的全套解決方案。供相關人員參考。
第1章 飼料中喹乙醇的測定
1.1 設備與試劑
表1-1所需化學試劑和溶液
序號 | 試劑和溶液 | 備注 |
1 | 甲醇 | 色譜純 |
2 | 超純水 | 18.2MΩ |
3 | 鹽酸 | 分析純 |
4 | 提取液:甲醇/水(5/95) | 配制 |
5 | 淋洗液1:0.02mol/L鹽酸 | 配制 |
6 | 淋洗液2:0.1mol/L鹽酸 | 配制 |
7 | 淋洗液3:甲醇/水(5/95) | 配制 |
8 | 洗脫液:甲醇/水(40/60) | 配制 |
9 | 喹乙醇標準品 | 純度>99.6% |
表1-2主要樣品前處理設備
序號 | 名稱 | 規格型號 | 備注 |
1 | 溶劑過濾器 | 1000mL | 流動相過濾 |
2 | 隔膜真空泵 | 0.08MPa,160W | 流動相過濾,GM-0.33A |
3 | 超聲清洗器 | 3L/6L, 40/60KHz, 120W | 溶解,流動相脫氣,AS3120 |
4 | 精密電子天平 | 感量為萬分之一 | 稱量 |
5 | 離心機 | 轉速可達3500r/min | 提取 |
6 | 搖床 | 轉速可達110r/min | 提取 |
7 | 螺口離心管 | 50mL | -- |
8 | 微孔有機相濾膜 | 孔徑0.22μm | 樣品過濾 |
9 | 固相萃取小柱 | Oasis HLB 1mL | 凈化 |
10 | 固相萃取儀 | 凈化 | |
11 | 恒溫振蕩器 | 提取 |
1.2 實驗方法
【試液制備】
喹乙醇標準儲備液:準確稱取喹乙醇標準品0.05020g(含量大于99.6%),于50mL棕色容量瓶中,超聲溶解,冷卻至室溫,定容至刻度,搖勻,使其溶液濃度為1mg/mL,儲存于-18℃冰箱中,可使用一個月。
喹乙醇標準工作液:準確量取標準儲備液于容量瓶中,用洗脫液稀釋,依次配制成濃度為10μg/mL、20μg/mL、40μg/mL、60μg/mL、80μg/mL、100.0μg/mL的標準溶液,現配現用。
【樣品前處理】
提取
稱取5g試樣(至0.1mg)于具塞錐形瓶中,加入50mL提取液,具塞至于搖床中,室溫下恒溫振蕩器振蕩速度110r/min,避光振蕩45min。提取液在3500r/min下離心10min,上清液經濾紙過濾,濾液作為SPE小柱凈化使用。
凈化
SPE小柱的活化:臨用前分別向SPE小柱中加入2mL甲醇和2mL超純水,對小柱進行活化。將提取濾液2mL加入活化好的SPE小柱,分別用2mL淋洗液1、淋洗液2和淋洗液3淋洗小柱。并將小柱吹干,zui后用2mL洗脫液洗脫。
洗脫液過0.22μm有機相濾膜,濾液上機測定。
【測試條件】
流動相:甲醇/水,梯度洗脫
表1-3 梯度洗脫表
時間/min | 超純水/% | 甲醇/% |
0 | 85 | 15 |
5 | 85 | 15 |
10 | 30 | 70 |
14 | 30 | 70 |
18 | 85 | 15 |
25 | 85 | 15 |
色譜柱:Supersil ODS-B (5μm,4.6mm×250mm)
流量:1.0mL/min
檢測波長:UV260nm
進樣體積:10μL
柱溫:30℃
1.3 實驗結果
【分析譜圖】
圖1-1喹乙醇標準品分析譜圖 1.喹乙醇
【分析結果】
表1-4喹乙醇測定結果
樣品 | 喹乙醇 | 拖尾因子 | 柱效(N/m) |
保留時間(min) | 9.171 | 1.12 | 52000 |
【線性范圍】
取喹乙醇標準工作液按照1.2中【測試條件】進行分析得到喹乙醇線性如下表:
樣品名稱 | 線性方程 | 線性相關系數R2 |
喹乙醇 | Y=68.494x-208.86 | 0.9998 |
由上表可知,喹乙醇樣品在10~100μg/mL的濃度范圍內線性良好。
1.4 參考文獻
[1]GB/T 8381.7-2009《飼料中喹乙醇的測定液相色譜法》。
第2章系統配制
Agress1100系列推薦配置
表2-1Agress1100型液相色譜梯度系統推薦配置清單
序號 | 名稱 | 數量 |
1 | D1100紫外-可見檢測器 | 1臺 |
2 | P1100高壓恒流泵 | 2臺 |
3 | ST1100溶劑脫盤 | 1臺 |
4 | VICI Valco高壓六通進樣閥 | 1個 |
5 | VB1110閥支架 | 1個 |
6 | W1100色譜數據處理工作站 | 1套 |
7 | GM1100梯度混合器 | 1臺 |
8 | Agress1100系統工具包 | 1套 |
9 | Supersil ODS2 5μm ID4.6×200mm液相色譜柱(標配) | 1支 |
10 | Supersil ODS-B 5μm ID4.6×250mm液相色譜柱(推薦) | 1支 |
11 | O1100色譜柱恒溫箱(推薦) | 1臺 |
12 | 500mL溶劑瓶(無色)(選配) | 2只 |
EClassical 3100系列推薦配置
表2-2EClassical3100型液相色譜梯度系統推薦配置清單
序號 | 名稱 | 數量 |
1 | UV3100紫外-可見檢測器 | 1臺 |
2 | P3100高壓恒流泵 | 2臺 |
3 | Rheodyne 7725i高壓六通進樣閥 | 1個 |
4 | ZJ-1閥支架 | 1個 |
5 | W5100色譜數據處理工作站 | 1套 |
6 | TP3100溶劑托盤 | 1臺 |
7 | EClassical3100 系統工具包 | 1套 |
8 | TD-1-15梯度混合器 | 1個 |
9 | Supersil ODS2 5μm ID4.6×200mm液相色譜柱(標配) | 1支 |
10 | Supersil ODS-B 5μm ID4.6×250mm液相色譜柱(推薦) | 1支 |
11 | O3100色譜柱恒溫箱(推薦) | 1臺 |
12 | 500mL溶劑瓶(無色)(選配) | 2只 |
13 | S3100自動進樣器(選配) | 1臺 |