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高效液相色譜儀的使用方法的具體步驟
隨著固定相的發展，有可能在充分保持生化物質活性的條件下完成其分離。液相色譜儀成為解決生化分析問題有前途的方法。由于HPLC具有高分辨率、高靈敏度、速度快、色譜柱可反復利用，流出組分易收集等優點，因而被廣泛應用到生物化學、食品分析、醫藥研究、環境分析、無機分析等各種領域。液相色譜儀與結構儀器的聯用是一個重要的發展方向。質譜連用技術受到普遍重視，如分析氨基甲酸酯農藥和多核芳烴等，液相色譜儀連用也發展很快，如在環境污染分析測定水中的烴類，海水中的不揮發烴類，使環境污染分析得到新的發展。
高效液相色譜儀的使用方法的具體步驟：
1、色譜柱它包括空柱和填料。空柱是內壁拋光的不銹鋼管，內徑為4～5mm，長100～250mm。按氣相色譜法中洗滌空柱的方法洗凈，用勻漿法填充固定相。將此柱裝入儀器的管路中，用柱式機械往復泵輸入新鮮脫氣的流動相。等基線平直后可用苯、萘、菲的混合試液，用正己烷或甲醇：水為流動相測定柱效及分離度塔板數在2～3萬/ml以上及分離度在1.5以上者，柱效好。
為防止柱污染，常用1個 50mm長，4~5mm內徑，裝有硅膠或立柱相同填料的保護柱接在主柱之前，以延長色譜柱的壽命。反相鍵合相柱用畢。必須用水充分流經，以洗去鹽類、酸堿等雜質防止柱生銹及填料中雜質的積聚，再用甲醇流經洗滌使色譜柱獲得再生。
2、流動相的洗脫方式配好經脫氣的流動相放于貯液瓶中，經過有濾過頭、內徑2mm的聚四氟乙烯管流入高壓泵進入色譜柱，zui后自檢測器流出或收集或作廢液回收。用流動相洗脫的方式有恒溶劑脫洗法，即自洗脫開始到結束，溶劑的配比恒定。
另一類為梯度洗脫法，即使溶劑的極性強度在色譜過程中逐漸增加。須按一定程序不斷改變流動相的濃度配比，從而使同一個試樣中組分性質相差較小的及較大的都能在一次色譜過程中很好分離，而整個色譜過程縮短。必須注意，梯度洗脫法不能用于分子排阻色譜及用電化學檢測的反相液相色譜法中。
3、檢測器適用于血藥濃度的檢測器有紫外線吸收，熒光發射和電化學三種。紫外檢測器應用于對紫外光有吸收的藥物，大多數藥物分子對紫外光有吸收，故能較普遍采用，檢測限有0.1μg左右。液相色譜儀有固定波長型、可變波長型及掃描器，既能使流動相停流作組分的定性定量檢測，又能提高測定靈敏度，重現性較好。熒光發射檢測器對能產生熒光的藥物才能使用。