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FAOBlue脂肪酸β-氧化(FAO)活性熒光定量試劑應用實例

時間:2024/8/14閱讀:930
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應用實例

一、FAOBlue及其香-豆-素衍生物的吸收光譜和熒光光譜

在PBS緩沖液(pH 7.4)中,FAO代謝后釋放的FAOBlue和香-豆-素衍生物的吸收光譜(左)、熒光光譜(右)。

FAOBlue經過FAO轉化為香-豆-素衍生物后,吸收峰從FAOBlue發生偏移至405 nm。因此,在405 nm的激發條件下,FAOBlue不會發出熒光,只有在通過FAO釋放香-豆-素衍生物時才會發出藍色熒光。

注:FAOBlue在300-380 nm(最大350 nm)激發時顯示藍色熒光(灰色線,370-450 nm),所以在選擇濾光片時請格外注意,避免同時激發未反應的FAOBlue以及FAO反應后的香-豆-素衍生物。

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二、各種癌細胞中FAO活性可視化

在4種癌細胞中加入FAOBlue,培養一定時間后進行熒光觀察。所有細胞都出現藍色熒光,而經過FAO抑制劑etomoxir處理后藍色熒光顯著減少。這些數據表明,藍色熒光是由活細胞中FAO活性引起的。(注:實驗條件根據細胞類型不同而不同)

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HepG2 : 5 μM, 30 min、 LNCaP: 20 μM, 120 min、HeLa : 20 μM, 120 min、A549 : 5 μM, 30 min


三、藥物對FAO活性的干擾

對HepG2細胞分別進行AICAR(通過 AMPK 激活的 FAO 激活劑)和ranolazine(部分 FAO 抑制劑)處理,隨后加入FAOBlue(5uM)孵育30分鐘。結果顯示,與對照細胞(未處理)相比,AICAR處理后明顯增加藍色熒光強度,ranolazine處理后則明顯降低藍色熒光強度。

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四、藥物對FAO活性影響的定量分析

將HepG2細胞與不同濃度的ND630預孵育4小時。ND630處理后,加入FAOBlue(5uM)孵育30分鐘。結果表明,伴隨ND630濃度增加,藍色熒光強度隨之增加。由此可知,ND630可增強FAO活性。(注:ND630是乙酰-CoA羧化酶抑制劑,被認為是治療非酒精性脂肪肝(NAFLD)的潛在藥物)

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五、NASH模型小鼠的FAO活性分析

非酒精性脂肪性肝炎(NASH)是一種與脂質相關的疾病,表現為脂肪酸代謝活性低。向正常小鼠和NASH模型小鼠以口服形式給藥增強脂質代謝的bezafibrate后,提取原代肝細胞。向各組細胞加入FAOBlue(5 μM)觀察其FAO活性,結果顯示,相較正常小鼠來源細胞,NASH模型小鼠來源細胞的FAO活性明顯被抑制。另外,給藥bezafibrate的NASH模型小鼠來源細胞中FAO活性被恢復。

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產品文獻

Uchinomiya et al., Chem. Commun., 56, 3023-3026 (2020) Fluorescence Detection of Metabolic Activity of Fatty Acid Beta Oxidation Activity in Living Cells.

 

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