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上海橋星貿易有限公司
主營產品： 進口透析袋,密理博ECL發光液,B27無血清培養基,Gibco膠原酶 |
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2016-2-22 閱讀(5071)
一、CCK8檢測細胞增殖/毒性的原理
Cell Counting Kit-8（簡稱CCK-8）試劑可用于簡便而準確的細胞增殖和毒性分析。其基本原理為：該試劑中含有WST-8【化學名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽】，它在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓*（1-Methoxy PMS）的作用下被細胞中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲瓚產物（Formazan dye）。生成的甲瓚物的數量與活細胞的數量成正比。因此可利用這一特性直接進行細胞增殖和毒性分析。
用途：藥物篩選、細胞增殖測定、細胞毒性測定、腫瘤藥敏試驗
CCK8的優點：
CCK8的缺點：
與以往的增殖/毒性測定試劑相比較：
檢測方法 | MTT法 | XTT法 | WST-1法 | CCK8法 |
甲臢產物的水溶性 | 差（需加有機溶劑溶解） | 好 | 好 | 好 |
產品性狀 | 粉末 | 2瓶溶液 | 溶液 | 1瓶溶液 |
使用方法 | 配成溶液后使用 | 現配現用 | 即開即用 | 即開即用 |
檢測靈敏度 | 高 | 很高 | 很高 | 高 |
檢測時間 | 較長 | 較短 | 較短 | zui短 |
檢測波長 | 560-600nm | 420-480nm | 420-480nm | 430-490nm |
細胞毒性 | 高，細胞形態*消失 | 很低，細胞形態不變 | 很低，細胞形態不變 | 很低，細胞形態不變 |
試劑穩定性 | 一般 | 較差 | 一般 | 很好 |
批量樣品檢測 | 可以 | 非常適合 | 非常適合 | 非常適合 |
便捷程度 | 一般 | 便捷 | 便捷 | 非常便捷 |
二、CCK8檢測細胞增殖/毒性的方法
實驗一：細胞增殖分析
1、制備細胞懸液：細胞計數
2、接種到96孔板中：根據合適的鋪板細胞數，每孔約100ul細胞懸液，同樣的樣本可做3個重復。
3、37℃培養箱中培養：細胞接種后貼壁大約需要培養2-4小時，如果不需要貼壁，這步可以省去。
4、加入10ul CCK8：由于每孔加入CCK8量比較少，有可能因試劑沾在孔壁上而帶來誤差，建議在加完試劑后輕輕敲擊培養板以幫助混勻。或者直接配置含10%CCK8的培養基，以換液的形式加入。
5、培養1-4小時:細胞種類不同，形成的Formazan的量也不一樣。如果顯色不夠的話，可以繼續培養，以確認*條件。特別是血液細胞形成的Formazan很少，需要較長的顯色時間（5-6小時）。
6、測定450nm吸光度：建議采用雙波長進行測定，檢測波長450-490nm，參比波長600-650nm。
實驗二：細胞毒性分析
1、制備細胞懸液：細胞計數
2、接種到96孔板中：根據合適的鋪板細胞數，每孔約100ul細胞懸液，同樣的樣本可做3個重復。
3、37℃培養箱中培養：細胞接種后貼壁大約需要培養2-4小時，如果不需要貼壁，這步可以省去。
4、加入不同濃度的毒性物質
5、37℃培養箱中培養：加入毒性物質的培養時間，要看毒性物質的性質和細胞的敏感性，一般要根據細胞周期來決定，起碼要一代以上的時間。
6、加入10ul CCK8：由于每孔加入CCK8量比較少，有可能因試劑沾在孔壁上而帶來誤差，建議在加完試劑后輕輕敲擊培養板以幫助混勻。
7、培養1-4小時:細胞種類不同，形成的Formazan的量也不一樣。如果顯色不夠的話，可以繼續培養，以確認*條件。特別是血液細胞形成的Formazan很少，需要較長的顯色時間（5-6小時）。
8、測定450nm吸光度：建議采用雙波長進行測定，檢測波長450-490nm，參比波長600-650nm。
注：
三、CCK8檢測細胞增殖/毒性的注意事項
