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上海橋星貿易有限公司
主營產品： 進口透析袋,密理博ECL發光液,B27無血清培養基,Gibco膠原酶 |
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2021-9-22 閱讀(2683)
32400梅里埃腸桿菌G-鑒定試劑（ID 32 E）說明書
32400梅里埃腸桿菌G-鑒定試劑（ID 32 E）說明書
【產品名稱】
通用名稱:腸桿菌和其他非苛養革蘭氏陰性桿菌鑒定試劑盒(比色法)
英文名稱:API 20 E
【包裝規格】
25 測試/盒、100 測試/盒。
【預期用途】
該產品用于腸桿菌和其它非苛養革蘭氏陰性桿菌的鑒定。
該產品用于可導致腹瀉、血流感染、尿路感染等的腸桿菌和其它非苛養革蘭氏陰性桿菌的鑒定,臨床常
見樣本來源有糞便、直腸拭子、尿、血等。
【檢驗原理】
API 20 E 試條由 20 個含干燥底物的微量小管組成。將菌懸液接種到管內,使小管內底物溶解。孵育過
程中,所產生的代謝產物通過自發反應或加入附加試劑后而變色。鑒定結果可根據說明書的判讀表進行
讀出,也可參照生化譜檢索手冊或鑒定軟件,得到鑒定結果。
【樣本要求】
API 20 E 不能直接用于臨床或其他標本(例如血樣,尿樣和糞樣、直腸拭子等等)。需要進行鑒定的微
生物必須首先根據標準微生物處理技術于適合腸桿菌和/或非苛養革蘭陰性桿菌生長的培養基上分離培
養。
【檢驗方法】
氧化酶試驗:
必須按照制造商的使用說明進行氧化酶試驗。由于它是最終圖譜的組成部分,請將其結果記錄于報告單
上( 十一個試驗)。
試條的準備
? 準備一個培養盒(盤和蓋子),倒入約 5mL 蒸餾水或軟化水【或其它不含添加劑或不含有能產生揮發
性氣體(如 Cl2, CO2,等)的化學物質的水】于盤的蜂窩小凹中,造成一個濕室。
? 在盤的長邊寫上菌株號(不要寫在蓋上,因為操作過程中很容易將蓋子放到其它試條上)
? 從包裝中取出試條。
? 將試條置于培養盒中。
注意:API 20 E 只能用于腸道細菌和或非苛養的革蘭陰性桿菌。苛養菌由于對營養有特殊要求并且需要
合適的防護措施(例如布魯氏菌屬 Brucella 和法朗西絲菌屬 Francisella),這些菌沒有包括在 API 20 E 數
據庫中。 必須采用其它方法,來排除或確認這些菌的存在。
接種物的準備
? 根據“警告及注意"一欄所列方法打開一安瓿 API 0.85% NaCl 培養基(5mL)或一安瓿 API 懸浮培養(5
mL), 或用含 5mL 0.85 NaCl 鹽水或不含添加劑的無菌蒸餾水。
? 用吸管或 PSIpette 從分離平板上挑取單個分純菌落至懸浮基物中。建議使用新鮮培養物(18-24
時)。
? 仔細研勻以達到均一的細菌懸液。
制備好的菌懸液必須立即使用。
注意:大多數弧菌(Vibrio)均嗜鹽,如懷疑菌株為弧菌,請使用 0.85% NaCl (5mL)培養基。腸桿菌和其它非苛養革蘭氏陰性桿菌鑒定試劑盒(比色法) 版本號 07584J- zh -2010/05
試條的接種
? 用同一根吸管,將菌懸液加入到試條的小管內。為避免在小管的基底部形成氣泡,請將試條輕微向前
傾斜并把吸管或者 PSI 管緊靠小杯邊緣加入菌液):
- CIT、VP 和 GEL 小管,菌液需充滿的管部和杯部。
- 其它管僅充滿管部(不是杯部)。
- 在試驗 ADH, LDC, ODC, H2S 和 URE 小杯內加入礦物油以形成厭氧環境。
? 蓋上培養盒。于 36℃±2℃孵育 18~24 小時。
【陽性判斷值】
請參考本說明書后的“反應鑒定表",表中列出了各種生化反應預期結果范圍。
【檢驗結果的解釋】
試條的判讀
? 孵育后,根據判讀表表判讀各反應結果。
? 如果 3 個或 3 個以上測定(GLU 試驗+或-)為陽性結果,記錄所有自發反應于結果報告單上并觀察需
附加試劑的試驗的結果:
- TDA 試驗:加 1 滴 TDA 試劑。深褐色為陽性反應,記錄于報告單上。
- IND 試驗:加 1 滴 JAMES 試劑。整個反應管出現粉紅色者為陽性,記錄于報告單上。
- VP 試驗:加 1 滴 VP 1 和 1 滴 VP 2 試劑。至少等待 10 分鐘,出現粉紅或紅色者表明為陽性結果,
記錄于報告單上。如淺粉紅色在 10 至 12 分鐘內出現,判斷結果為陰性。
注意:吲哚產生試驗必須 進行,因為該反應釋放的氣體產物會千擾試條的其他試驗。在加入附加
試劑后,請小心勿調換培養盒蓋。
? 如果加入附加試劑前陽性結果(包括 GLU 試驗)的數量少于 3 個:
- 重新培養 24 小時(土 2 小時),且不要加任何試劑。
- 重新進行需要加入附加試劑的試驗(如前說明)。
- 為了完成鑒定,可能需要進行補充試驗(參考有關鑒定的段落)。
解釋
鑒定結果根據數值編碼獲得。
? 數值編碼的確定:
在結果報告單,每 3 個試驗為一組,每個陽性試驗分別賦予數值 1、2 或 4,在每組中,陽性反應以相
應的數值相加,由此可得到一個 7 位數字的編碼。氧化酶反應構成第 21 個試驗,如陽性則賦予數值 4。
? 鑒定:
鑒定結果是根據數據庫(V4.1)得到。
*根據鑒定檢索手冊:
- 從檢索手冊中查找數值編碼。
*根據 apiweb TMM鑒定軟件:
- 在鍵盤上輸入 7 位數字的數值編碼。
在某些情況下,7 位數字的數值編碼還不能區分細菌,必須進行以下一些補充試驗來進一步的鑒定:
- 硝酸鹽還原到亞硝酸鹽(NO2)和氮氣(N2):各加一滴 NIT 1 和 NIT2 試劑于葡萄糖(GLU 管內,待 2~3
鐘后,紅色表示陽性結果(NO2)。陰性反應(黃色)可能由于還原至 N2 (有時還有氣泡):加 2-3mg 鋅
粉到葡萄糖(GLU)管,5 分鐘后,如果管保持黃色表示陽性結果(N2),記錄于報告單。如果變為橘紅,
則是陰性反應:仍留在管內硝酸鹽被鋅粉還原。該反應對檢測革蘭陰性、氧化酶陽性的桿菌有用。
注意:出于和吲哚試驗同樣的原因(參考“試條的判讀"中的注意項),硝酸鹽還原試驗必須 進行。
- 動力(MOB):接種一安瓿 APIM 培養基(參見產品說明書)。腸桿菌和其它非苛養革蘭氏陰性桿菌鑒定試劑盒(比色法) 版本號 07584J- zh -2010/05
- 麥康凱(MacConkey)培養基生長實驗(McC):接種一個麥康凱(MacConkey)平板(參見產品說明書)。
- 葡萄糖氧化(0F-0):接種一安瓿 API OF 培養基(參見產品說明書)。
- 葡萄糖發酵(OF-F):接種一安瓿 API OF 培養基(參見產品說明書)。
這些在數值編碼本開始部分有所介紹的補充試驗,可以組成 9 位數的數值索引。從而可以用鑒定軟件
獲得鑒定結果。
