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生化培養箱中的大腸桿菌的檢測方法

閱讀:1387        發布時間:2019-9-17

 大腸菌群測定的操作細則大腸菌群系指一群能發酵乳糖、產酸產氣、需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽胞桿菌。該菌主要來于人畜糞便,故以此作為糞便污染指標來評價食品的衛生質量,推斷食品中有否污染腸道致病菌的可能。

  食品中大腸菌群數系以100mL(g)檢樣內大腸菌群zui可能數(MPN)表示。

  1 設備和材料1.1 生化培養箱:恒定溫度36±1℃。

  1.2 冰箱:0~4℃。

  1.3 恒溫水浴 :44.5±0.5℃。

  1.4 天平。

  1.5 顯微鏡。

  1.6 均質器或乳缽。

  1.7 平皿:直徑為90mm。

  1.8 試管。

  1.9 吸管。

  1.10 廣口瓶或三角燒瓶:容量為500mL。

  1.11 玻璃珠:直徑約5mm。

  1.12 載玻片。

  1.13 酒精燈。

  1.14 試管架。

  2 培養基和試劑2.1 乳糖膽鹽發酵管:按GB 4789.28中4.9規定。

  2.2 伊紅美藍瓊脂平板:按GB 4789.28中4.25規定。

  2.3 乳糖發酵管:按GB 4789.28中4.10規定。

  2.4 EC 肉湯:按GB 4789.28中4.11規定。

  2.5 磷酸鹽緩沖稀釋液:按GB 4789.28中3.22規定。

  2.6 生理鹽水。

  2.7 革蘭氏染色液:按GB 4789.28中2.2規定。

  3 操作步驟3.1 檢樣稀釋3.1.1 以無菌操作將檢樣25mL(或g)放于有225mL滅菌生理鹽水或其他稀釋液的滅菌玻璃瓶內(瓶內予置適當數量的玻璃珠)或滅菌乳缽內,經充分振搖或研磨做成1:10的均勻稀釋液。固體檢樣用均質器,以8 000-10 000 r/min的速度處理1min,做成1:10的均勻稀釋液。

  3.1.2 用1mL滅菌吸管吸取1:10稀釋液1mL,注入含有9mL滅菌生理鹽水或其他稀釋液的試管內,振搖試管混勻,做成1:100的稀釋液。

  3.1.3 另取1mL滅菌吸管,按上條操作依次做10倍遞增稀釋液,每遞增稀釋一次,換用1支1mL滅菌吸管。

  3.1.4 根據食品衛生標準要求或對檢樣污染情況的估計,選擇三個稀釋度,每個稀釋度,接種3管。

  3.2 乳糖發酵試驗將待檢樣品接種于乳糖 膽鹽發酵管內,接種量在1mL以上者,用雙料乳糖膽鹽發酵管,1mL及1mL以下者,用單料乳糖膽鹽發酵管。每一稀釋度接種3管,置36±1℃ 溫箱內,培養24±2h,如所有乳糖膽鹽發酵管都不產氣,則可報告為大腸菌群陰性,如有產氣者,則按下列程序進行。

  3.3 分離培養將產氣的發酵管分別轉種在伊紅美藍瓊脂平板上,置36±1℃ 溫箱內,培養18-24h,然后取出,觀察菌落形態,并做革蘭氏染色和證實試驗。

  3.4 證實試驗在上述平板上,挑取可疑大腸菌群菌落1-2個進行革蘭氏染色,同時接種乳糖發酵管,置 36±1℃溫箱內培養24±2h,觀察產氣情況。凡乳糖管產氣、革蘭氏染色為陰性的無芽胞桿菌,即可報告為大腸菌群陽性。

  3.5 報告根據證實為大腸菌群陽性的管數,查MPN檢索表,報告每100mL(g)大腸菌群的MPN值。

  4 糞大腸菌群(faecal coliform)4.1 用接種環將所有產氣的乳糖膽鹽發酵管培養物(見3.2條)轉種于EC肉湯管內,置44.5±0.2℃水浴箱內(水浴箱內的水面應高于EC肉湯液面),培養24±2h,經培養后,如所有EC肉湯管均不產氣,則可報告為陰性;如有產氣者,則將所有產氣的EC肉湯管分別轉種于伊紅美藍瓊脂平板上,置 培養18-24h,凡平板上有典型菌落者,則證實為糞大腸菌群陽性。

  4.2 結果報告根據證實為糞大腸菌群的陽性管數,查MPN檢索表,報告每100mL(g)糞大腸菌群的MPN值。

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