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國家藥典委員會發布公告，《中國藥典》2020年版第一增補本已編制完成，將于2024年3月12日正式實施。本篇對生物制品新增指導原則中“9405 糖蛋白的糖基化分析指導原則”的相關內容進行梳理，并為廣大客戶提供島津的應對方案。下圖為指導原則框架。

糖蛋白的糖基化是通過糖基受體、糖基供體和糖基轉移酶三類分子的協同作用將單糖或寡糖以糖苷鍵形式連接在蛋白質的氨基酸殘基上，是蛋白質的一種翻譯后修飾。本指導原則闡述了糖蛋白糖基化分析的理念、方法及應用和驗證的相關要求。圖1為糖基化分析的決策框架圖。

糖基化分析流程通常為一個多步驟的過程，必要時還需要進行前處理（糖蛋白分離和純化）以去除干擾因素（如輔料、鹽等）。按照完整糖蛋白分析、糖肽分析、寡糖分析、單糖分析等4種不同的互補分析方法，完成糖基化分析的全部流程。糖蛋白N-糖基化和O-糖基化分析流程可參見圖2。

下面具體考量幾種糖蛋白分析流程和方法。

1完整糖蛋白分析：提供關于糖蛋白糖基化分布等總體信息

1）  糖基化分布、分子量：毛細管電泳法、質譜法

2）  糖基化導致的蛋白質分子量遷移：聚丙烯酰胺凝膠電泳法、毛細管電泳法

3）  蛋白片段糖基化修飾：還原酶解后質譜分析法

4）  唾液酸修飾程度：高效液相色譜法、離子色譜法、等電聚焦電泳法、毛細管電泳法

應用案例1：完整糖蛋白分子量分析

2糖肽分析：提供特定糖基化位點的糖基化類型、占有率、寡糖結構信息

1）  糖肽富集或分離：反相/親水高效液相色譜法、毛細管電泳法

2）  糖基化位點及糖肽結構：質譜法

3）  寡糖分子量、位點占有率：質譜法

應用案例2：糖肽結構分析

3寡糖分析：提供多種寡糖類型的結構以及相對含量的信息

1）  非衍生寡糖的分離與分析：高效陰離子色譜法、多孔石墨化碳色譜法、質譜法

2）  衍生寡糖的分離與分析：色譜法、毛細管電泳法、質譜法（熒光標記衍生、紫外標記衍生、全甲基化衍生）

應用案例3：2-AB標記的N糖分析

4單糖分析：提供單糖鑒別、含量及單糖組成信息

1）  非衍生單糖的分離與定量分析：比色法、高效陰離子色譜法、多孔石墨化碳色譜法、質譜法

2）  衍生單糖的分離與定量分析：反相色譜法、離子交換色譜法、氣相色譜法、毛細管電泳法、熒光或紫外檢測法

應用案例4：抗體中唾液酸測定

中國藥典2015版和2020版提出了糖基化的重要性，有部分具體方法，但缺乏糖基化分析指導原則。本新增指導原則從完整糖蛋白分析、糖肽分析、寡糖分析、單糖分析4個方面詳細收載了前處理方法及檢測方法，指導如何選擇適當的方法完成良好的糖基化分析。島津不斷開發新方法，持續推出滿足藥典指導原則的應用方案。

注：完整應用報告請掃描下方二維碼獲取。

1臺式 MALDI-TOF MS 應用于糖蛋白質分子量測定

2 MALDImini應用于糖肽分析

3利用Q-TOF結合熒光檢測器分析2-AB標記N糖

4生物藥中寡糖評估方法的介紹

5超高效液相色譜法用于抗體中唾液酸的測定

6 LCMS用于抗體中唾液酸的測定    

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