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上海一研生物科技有限公司

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亮發光桿菌代謝產物的差異情況

閱讀:791      發布時間:2018-4-9
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亮發光桿菌使用 HPLC 檢測各菌株發酵產物次生代謝產物的差異情況,分析流動相為:乙腈-水(2‰的乙酸),流速:0.6 mL/min,均采用全波長掃描。HPLC 洗脫條件: 0–40 min : 10%–50% 乙腈梯度, 40–50 min:50%–75%乙腈梯度,50–60 min: 75%–100%乙腈梯度,60–68 min:純乙腈洗脫, 70–90 min:10%乙腈平衡柱子。色譜柱為:分析柱為 Agilent 5 TC-C18(2) 250 mm×4.6 mm,SN: 588925-902,PN:509550。進樣體積為 10 μL。

利用 10 g的60–100目層析硅膠將制備好的粗提物進行拌樣。然后,使用 60 g 的 200–300 目層析硅膠進行干法裝柱,層析柱的規格為:4 cm×60 cm。待上樣完成后,使用醇為洗脫劑進行梯度洗脫。首先使用500 mL 進行洗脫,再逐漸增加洗脫劑中甲醇的比例,當洗脫劑中: 甲醇的比例為20∶1 時(洗脫體積為 1.5 L),利用 HPLC 檢測該組分,發現了一個化合物與?PKS-3 發酵樣品中所缺少的化合物的保留時間和特征吸收波長均一致,該份樣品命名為SF1。當洗脫劑:甲醇的比例為 10∶1 時(洗脫體積為 1.2 L),將洗脫下來的組分利用HPLC 檢測,發現含有 ?PKS-9 中缺少的化合物,該份樣品命名為SF2。

接下來,亮發光桿菌將含有目標化合物的兩份樣品,分別使用 Sephadex LH-20 進行凝膠過濾色譜純化 (色譜柱規格為 1.8 cm×160 cm),洗脫劑為甲醇,流速為 6–8 d/min,然后,分別將含有目標化合物的樣品進行減壓干燥后,繼續分離純化。其中,SF1 組分利用正相硅膠柱層析(色譜柱規格為 1.5 cm×50 cm),裝柱硅膠為 18.5 g,洗脫劑為石油醚:丙酮=85:15,分別收集洗脫組分,將含有較純化合物的組分進行減壓干燥,zui終得到化合物 SF1 的純品約 100 mg。SF2 組分再利用正相硅膠柱層析(色譜柱規格為 1.5 cm×50 cm),裝柱硅膠為 15.0 g,利用:甲醇=10:1 進行洗脫,將含有較純的目標化合物組分進行減壓干燥,zui終得到化合物 SF2 的純品為 20 mg。
Ciclopirox Related Compound A    25mg    環吡酮相關物質A標準品        
Ciclopirox Related Compound B    25mg    環吡酮相關物質B標準品    14818-35-0    
Cilastatin Ammonium Salt    100mg    西司他丁銨標準品        
Cilostazol    200mg    西洛他唑標準品    73963-72-1    
Cimetidine    200mg    西咪替丁標準品    51481-61-9    
Cimetidine Hydrochloride    200mg    鹽酸西咪替丁標準品    70059-30-2    
Cinoxacin    200mg    西諾沙星標準品    28657-80-9    
Ciprofloxacin    200mg    環丙沙星標準品    85721-33-1    
Ciprofloxacin Formamide    125mg    環丙沙星甲酰胺標準品    93594-39-9    
Ciprofloxacin Hydrochloride    400mg    鹽酸環丙沙星標準品    86393-32-0  
亮發光桿菌 

 

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