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上海一研生物科技有限公司

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傘枝梨頭霉PCR試劑盒的設計引物應遵循哪些原則

閱讀:1393      發布時間:2020-11-25
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   傘枝梨頭霉PCR試劑盒可用于檢測食品或其他材料中是否有的成分。現代食品加工工藝改變了食材原有的味道、氣味、色澤、紋理和質地等特性,因此傳統的感官鑒別技術已經無法對食材的真偽進行準確的鑒定。同時部分食材還有致敏性,因此基于基因檢測的快速靈敏的食材來源檢測技術將對食品監管和安全提供重要的保障。
 
  特點:
  1.即開即用,用戶只需要提供病毒DNA模板。
  2.引物經過優化,靈敏性比使用世界動物衛生組織推薦的引物高100倍以上。
  3.特異性高,引物是根據保守的vp72基因設計。
  4..提供陽性對照,便于分析實驗結果。
  5.PCRmix中含上樣染料,PCR后可以直接上樣電泳。本試劑盒足夠做40μL體系的PCR50次,只能用于科研。
 
  傘枝梨頭霉PCR試劑盒設計引物應遵循以下原則:
  ①引物長度:15-30bp,常用為20bp左右。
  ②引物擴增跨度:以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
  ③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現非特異條帶。ATGC好隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
  ④避免引物內部出現二級結構,避免兩條引物間互補,特別是3’端的互補,否則會形成引物二聚體,產生非特異的擴增條帶。
  ⑤引物3’端的堿基,特別是倒數第二個堿基,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
  ⑥引物中有或能加上合適的酶切位點,被擴增的靶序列有適宜的酶切位點,這對酶切分析或分子很有好處。
  ⑦引物的特異性:引物應與核酸序列數據庫的其它序列無明顯同源性。

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