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上海一研生物科技有限公司

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ELISA方法測定抗體間接法原理

閱讀:6563      發布時間:2019-5-15
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        在運用ELISA方法測定抗體方面,通常所用的方法稱為間接法,也是目前zui常用的方法,其原理:間接法首先用抗原包被于固相載體,這些包被的抗原必須是可溶性的,或者至少是極微小的顆粒,經洗滌,加入含有被測抗體之標本,再經孵育洗滌后,加入酶標記抗抗體,(對人的標本來說即加酶標抗人球蛋白IgG、IgM),再經孵育洗滌后,加底物顯色,底物降解的量,即為欲測抗體的量,其結果可用目測或用分光光度計定量測定。

操作步驟:

1.將抗原按5 μg/ml稀釋于碳酸鹽緩沖液(pH 9.6),100 μl /孔,4℃過夜。

2.次日PBS-T清洗4次(快1慢3,間隔5分鐘)。

3.加2%BSA封閉室溫1 h,200 μl /孔。

4.陽性對照從10ug/ml,做倍必稀釋,待測血清從1:50做倍比稀釋,預試驗后確定稀釋倍數及陽性對照的起始濃度及稀釋數量(以可以做標準曲線為參數),室溫1h。

5.PBS-T清洗4次(快1慢3,間隔5分鐘)。

6.加入1:3000(不同公司有不同的推薦稀釋度) PBS-T稀釋的HRP標記的山羊抗人IgG,100 μl /孔,室溫1h。

7.PBS-T清洗4次(快1慢3,間隔5分鐘)。

8.顯色,100 μl /孔,顏色變深后中止顯色,2M硫酸在BIO-RAD酶標儀上讀數,可用ABTS,OPD,TMB等

 

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