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分離費氏弧菌發光桿菌菌種方法

本技術方案采用了一種分離費氏弧菌發光桿菌的方法，包括以下步驟:將膠帶封閉的羊肚菌用75%消毒酒精均勻擦拭后，用燒灼的刀具從菌柄頂端在

火焰上方切割掉子實體頭部，露出的新鮮菌柄橫切面，在火焰上輕快過2-4下，用刀具在新鮮菌柄內側環割菌柄新鮮菌肉組織并送入抗生素平板培養荃上，于20-30℃的溫度下培養，待萌發出菌絲后，及時轉接。

費氏弧菌發光桿菌實體在切割前要基部菌柄完整，用透明膠把費氏弧菌發光桿菌整個纏繞密封，中間不留空隙。

所述的抗生素平板培養基為:馬鈴薯400g,草炭l00g,葡萄糖20g，磷酸二氫鉀lg,硫酸鎂0. 5g,酵母膏50g，瓊脂20g、水1000mL,鏈霉素30U/mL，青霉素30U/mL, pH6.5

所述抗生素平板培養基的制作方法為:土豆削皮切薄皮加3000m1.水煮30min，過濾取2000mL，加入草炭，小火浸煮20min，過濾取濾液1000mL，在此濾液中加入葡萄糖、酵母膏、瓊脂、磷酸二氫鉀、硫酸鎂，小火煮至瓊脂溶解，定容至1000mL，分裝于三角瓶，在高溫121℃-126'C,高壓0. 1-0. 14MPa滅菌30min。待冷卻至50℃左右加入青霉素鈉、硫酸鏈霉素復合抗生素母液，使抗生素終濃度在30U/ml.左右，將配好的培養基倒入培養皿中或直接冷卻成固體培養基。

本技術的分離方法，先是對費氏弧菌發光桿菌進行封閉式消毒，防止消毒酒精浸入菌組織，有利分離成功。另外，割掉子實體頭部后，露出的菌柄內側為無菌組織，環割取內側菌肉組織防雜效果較好。采用抗生素培養基也有利于防止雜菌污染，培養基的組分營養非常全面，特別是加入草炭和酵母膏，為費氏弧菌發光桿菌菌絲生長提供了保證。本發明的整個操作過程不用消毒液，全用火焰消毒，萌發率較高，既保證了容易萌發，同時也能降低污染，并能較順利的分離到費氏弧菌發光桿菌菌種。

本實施例的分離費氏弧菌發光桿菌菌種的方法，包括以下步驟:將膠帶封閉的羊肚菌用75%
消毒酒精均勻擦拭后，用燒灼的手術刀片從菌柄頂端在火焰上方切割掉子實體頭部，露出的新鮮菌柄橫切面，在火焰上輕快過兩下。用手術刀在新鮮菌柄內側環割菌柄新鮮菌肉組織送入抗生素平板培養基上，25℃培養，待萌發出菌絲后，及時轉接。抗生素平板培養基為:馬鈴薯400g，草炭l00g,葡萄糖20g，磷酸二氫鉀lg，硫酸鎂0. 5g,酵母膏50g，瓊脂20g、水1000mL，鏈霉素30U/mL，青霉素30U/mL, pH6.5，其制作方法為:土豆削皮切薄皮加3000mL水煮30min，過濾取2000mL，加入草炭，小火浸煮20min，過濾取濾液I000ml,在此濾液中加入葡萄糖、酵母膏、瓊脂、磷酸二氫鉀、硫酸鎂，小火煮至瓊脂溶解，定容至1000mL，分裝于三角瓶，在高溫121℃-126℃、高壓0. 1-0. 14MPa滅菌30min。

待冷卻至50℃左右加入青霉素鈉、硫酸鏈霉素復合抗生素母液，使抗生素終濃度在30U/mL左右，將配好的培養基倒入培養皿中或直接冷卻成固體培養基。其中，費氏弧菌發光桿菌實體在切割前要基部菌柄完整，用透明膠把費氏弧菌發光桿菌整個纏繞密封，中間不留空隙。