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β-Amyloid ELISA 試劑盒

——定量檢測 Aβ40/Aβ42

　　阿爾茨海默癥（Alzheimer's Disease, AD)，俗稱老年癡呆癥，其特征是在大腦神經細胞中存在老年斑（Senile Plaques,SPs） 和神經元纖維纏結（Neuro Fibrillary Tangles, NFT），老年斑的主要組成蛋白是 β- 淀粉樣多肽（Amyloid Peptide, Aβ）40 和 42(43)，Aβ42 比 Aβ40 更容易發生聚集。因此，蛋白樣多肽的聚集開始于 Aβ42 而不是 Aβ40。出現了 Aβ42 而沒有出現 Aβ40 是阿 爾茨海默癥的早期特征；出現了 Aβ40，尤其是在成熟老年斑的中心部分出現則代表進入阿爾茨海默癥的晚期階段。

　　本產品可檢測與阿爾茨海默病相關的淀粉樣蛋白β蛋白質（1-40）以及淀粉樣蛋白β蛋白質（1-42）的高靈敏度ELISA試劑盒。與以往試劑盒相比較，檢測靈敏度提高約10倍，檢測范圍在0.1~20.0（pmol/L）。

　　另外，因為以往產品同樣標志抗體Fab’化，非特異性結合降低。由于運用的是武田藥品工業株式會社開發的特異性非常高的單克隆抗體，不僅是組織提取液、培養上清液、腦脊髓液，而且以前檢測較困難的血漿中Aβ40以及Aβ42亦可高靈敏度檢測。

◆優點

●  可檢測多種樣品類型：腦組織樣品，培養基上清樣品，腦脊髓液樣品， 血漿樣品等

●  特異性*的抗體，避免非特異性結合

　BAN50：Aβ肽N末端1-16特異性

　BNT77：Aβ11-28特異性

 　BA27：Aβ40 C末端特異性

　BC05：Aβ45 C末端特異性

●  *的靈敏度，可檢測至 pmol 級含量

●  使用此產品的文章已在Science、Biochemistry、Neuron 等多家刊物發表

◆試劑盒構成　　

抗體包被的微平板                          1 塊 標準溶液                                        2mL×2支   標準稀釋液                                     2 mL×2支 清洗液（20x）                               50 mL×1支 HRP標記抗體溶液                          12 mL×1支 TMB溶液                                        12 mL×1支 終止液                                            12 mL×1支 密封件                                            3支

① 加入100 μL 的標準品和樣品，在4 度冰箱中密封過夜。 

↓

② 加入HRP標記的抗體溶液，在4 度冰箱中孵育。

↓

③ 加入100 μL TMB 溶液室溫孵育30 分鐘，避光，密封蓋子，進行顯色反應。

↓

④ 加入100 μL 終止液，測OD450 nm值。

◆案例

案例1.人、小鼠血漿的測定

　　使用EDTA2K真空采血管采血，置于5000 g、4℃、離心15分鐘，分離血漿，使用之前存放于-80℃。

　　用試劑盒附帶的標準稀釋液，4倍樣本稀釋后測定。

　　（*Aβ（1-40）以及Aβ（x-40）的測定使用人β淀粉樣蛋白（1-40）ELISA試劑盒WakoⅡ（產品編號：298-64601）以及人/大鼠β淀粉樣蛋白（40）ELISA試劑盒WakoⅡ（產品編號：294-64701）。

案例2.小鼠腦組織的測定

　　用2 mL的Tris鹽水提取12月齡APP轉基因小鼠（J20）的腦半球，使用之前置于-20℃保存。

　　用試劑盒附帶的標準稀釋液，2倍樣本稀釋后測定。

　　除了轉基因（tg）小鼠，也可測定野生型（wt）小鼠的微量Aβ。

（數據提供：東京大學大學院藥學研究科 臨床藥學教室 巖坪教授 橋本助手）

標準曲線

　　用試劑盒附帶的標準溶液制作標準曲線。結果顯示，在0.1~20.0（pmol/L）范圍內，接近于直線。

添加回收實驗

　　向血漿中分別加入5、10、20（pmol/L），4倍稀釋后記錄測定時的回收率（%）（測定值/理論值）。基本顯示較高的回收率。

稀釋實驗

　　將A、C、E的正常人血漿稀釋2~16倍后求稀釋曲線。結果顯示，特別是人/大鼠系列獲得了良好的稀釋曲線。

◆產品列表