15221858802
當前位置：上海信裕生物科技有限公司>>技術文章>>技術指南 | 瓊脂糖凝膠電泳詳解
創造了Tiselius電泳儀，建立了研究蛋白質的移動界面電泳方法，并證明了血清是由白蛋白及α、β、γ球蛋白組成的。
電泳是指帶電顆粒在電場的作用下發生遷移的過程。許多重要的生物分子，如氨基酸、多肽、蛋白質、核苷酸、核酸等都具有可電離基團，它們在某個特定的pH值下可以帶正電或負電，在電場的作用下，這些帶電分子會向著與其所帶電荷極性相反的電極方向移動。電泳技術就是利用在電場的作用下，由于待分離樣品中各種分子帶電性質以及分子本身大小、形狀等性質的差異，使帶電分子產生不同的遷移速度，從而對樣品進行分離、鑒定或提純的技術。
1.瓊脂糖凝膠電泳原理:瓊脂糖凝膠具絡,物質分子通過時到阻力，大分子物質在涌動時受到的阻力大，因此在凝膠電泳中，帶電顆粒的分離不僅取決于凈電荷的性質和數量，而且還取決于分子大小，這就大大提高了分辨能力。但由于其孔徑相比于蛋白質太大，對大多數蛋白質來說其分子篩效應微不足道，現廣泛應用于核酸的研究中。瓊脂糖凝膠電泳是用瓊脂糖作支持介質的一種電泳方法。其分析原理與其他支持物電泳最主要區別是:心兼有“分子篩"和“電泳"的雙重作用。
2.瓊脂糖凝膠電泳用途:用于DNA切膠回收；用于DNA分離；用于佐證DNA是否重組、質粒是否切開以及其他分子生物學研究
3.瓊脂糖凝膠電泳特點：
I、優點：
因不含硫酸根和羧基，幾乎消除了瓊脂的電滲
對蛋白質吸附極微，故無拖尾現象。
凝膠結構均勻，孔徑較大，可用來分離酶的復合物、核酸、病毒等大分子物質。
透明度較好，可直接或干燥成薄膜后進行染色。
不吸收紫外光，可直接利用紫外光吸收法作定量測定
有熱可逆性
II、缺點：
機械強度差，易破碎，濃度不能太低。
易被細菌污染，不易保存，臨用前配制。
瓊脂糖支持層上的區帶易于擴散，電泳后必須立即固定染色。
與PAGE相比，分子篩作用小，區帶少。
1.制備1%瓊脂糖凝膠(大膠用70ml,小膠用50ml):稱取0.7 g(0.5 g)瓊脂糖置于錐形瓶中,加入70 ml(50ml)1×TAE,瓶口倒扣小燒杯.微波爐加熱煮沸3次至瓊脂糖全部融化,搖勻，即成1.0%瓊脂糖凝膠液.
取電泳槽內的有機玻璃內槽(制膠槽)洗干凈,晾干,放入制膠玻璃板.取透明膠帶將玻璃板與內槽兩端邊緣封好,形成模子.將內槽置于水平位置,并在固定位置放好梳子.將冷卻到65℃左右的瓊脂糖凝膠液混勻小心地倒入內槽玻璃板上,使膠液緩慢展開，直到整個玻璃板表面形成均勻膠層.室溫下靜置直至凝膠*疑固,垂直輕拔梳子,取下膠帶,將凝膠及內槽放入電泳槽中.添加
在點樣板或pa rafi lm上混合DNA樣品和上樣緩沖液,上樣緩沖液的最終稀釋倍數應不小于1X.用10ul微量移液器分別將樣品加入膠板的樣品小槽內,每加完一個樣品,應更換一個加樣頭,以防污染,加樣時勿碰壞樣品孔周圍的凝膠面.(注意:加樣前要先記下加樣的順序).
加樣后的凝膠板立即通電進行電泳,電壓60-100V,樣品由負極(黑色)向正極(紅色)方向移動.電壓升高,瓊脂糖凝膠的有效分離范圍降低.當溴酚藍移動到距離膠板下沿約1cm處時,停止電泳.
DNA分子的大小
凝膠的濃度
DNA的構象
使用的電壓
瓊脂糖的種類
電泳緩沖液
嵌入染料的存在
以上這些因素都會對電泳產生影響，具體詳細內容就不在這里給大家一一介紹了，以后大家遇到什么問題的話，都可以從這幾方面入手去找問題
請輸入賬號
請輸入密碼
請輸驗證碼
以上信息由企業自行提供，信息內容的真實性、準確性和合法性由相關企業負責，化工儀器網對此不承擔任何保證責任。
溫馨提示：為規避購買風險，建議您在購買產品前務必確認供應商資質及產品質量。
