您好, 歡迎來到化工儀器網
水產品中氯霉素殘留測定的步驟及水產品中氯霉素殘留測定儀
水產品中氯霉素的測定
1.目的 使氯霉素的測定處于受控狀態，保證氯霉素檢測結果的準確性與一致性；規范參加本項目檢測工作人員的操作規程。
2.適用范圍 適用于水產品中氯霉素殘留量的篩選檢驗。
3.引用標準 《動物源食品中氯霉素殘留檢測 酶聯免疫吸附法》農業部1025號公告-26-2008 《氯霉素酶聯免疫檢測試劑盒說明書》 深圳市芬析儀器制造有限公司 《無公害食品 水發水產品》 NY 5172-2002 《分析實驗室用水規格和試驗方法》GB/T 6682-2008 《食品衛生檢驗方法 理化部分 總則》 GB/T5009.1-2003
4.概述 氯霉素屬廣譜抗生素，曾在畜牧業中廣為應用。但氯霉素有較強的副作用和毒性作用，如果氯霉素在食用動物中殘留，可通過食物鏈傳給人類，長期微量攝入氯霉素，不僅使人體腸道正常菌群失調，而且還會引起多種疾病，對人類的健康造成危害。世界上許多國家禁止此藥用于生產食品動物，并規定了在畜產品中氯霉素不得檢出。
5.測定
5.1.原理
氯霉素酶聯免疫檢測試劑盒，主要是利用抗原與抗體的特異性免疫化學反應的基本原理來進行的，換句話說，就是利用酶標記物與樣品中的氯霉素與微孔中的抗體進行競爭反應。在整個反應當中，如果樣品中的氯霉素殘留的越多，相對地就會競爭反應越多的酶標記物，使得能結合上抗體的酶標記物相對地減少，用TMB底物顯色，樣品中的氯霉素含量與樣品的吸光度值呈反比，與標準曲線比較即可得出氯霉素含量。
5.2.儀器
5.2.1.CSY-E96K抗生素殘留檢測儀(配備450nm濾光片)。（深圳市芬析儀器制造有限公司）
5.2.2.旋轉蒸發儀。
5.2.3.勻漿器。
5.2.4.振蕩器。
5.2.5.冷凍離心機。
5.2.6.微量移液器:單道20μL、50μL、100μL、1000μL；多道250μL。
5.2.7.天平:感量0.01g。
5.2.8.氮氣吹干裝置。
水產品中氯霉素的測定
5.3.試劑和材料 以下所有試劑，均為分析純試劑；水為符合GB/T 6682規定的二級水。
5.3.1.乙酸乙酯。
5.3.2.乙腈。
5.3.3.正己烷。
5.3.4.0.5N鹽酸溶液
5.3.5.0.5N氫氧化鈉溶液
5.3.6.氯霉素酶聯免疫試劑盒:2℃～8℃冰箱中保存。
5.4.樣本處理
a) 將3克已均質的樣品放入15mL離心管中，再加入6mL乙酸乙酯，震蕩5分鐘。
b) 用離心機離心1700×g10分鐘，取2mL上層液(乙酸乙酯)至10mL玻璃管中，于50℃下，利 用氮氣將有機溶劑吹干。
c) 在此玻璃管中加入正己烷1mL，先將殘余物*溶解后，再加入1mL樣品稀釋液，震蕩30 秒鐘。
d) 用離心機離心1700×g 10分鐘，利用吸管吸去包含中問乳化層部分的上層液(正己烷)，再 吸取下層液(水層)備用。
稀釋倍數:1 若待測物為白蝦可按以下流程將樣品做8倍濃縮以增加檢品敏感度
a) 將6克已均質的樣品放入15mL離心管中，再加入6mL乙酸乙酯，震蕩5分鐘。
b) 用離心機離心1700×g 10分鐘，取4mL上層液(乙酸乙酯)至10mL玻璃管中，于50℃下，利 用氮氣將有機溶劑吹干。
c) 在此玻璃管中加入正己烷2mL，先將殘余物*溶解后，再加入0.5mL樣品稀釋液，震蕩30 秒鐘。
d) 用離心機離心1700×g 10分鐘，利用吸管吸去包含中問乳化層部分的上層液(正己烷)，再 吸取下層液(水層)備用。 稀釋倍數:0.125
5.5.酶聯免疫測定
5.5.1.將標準品對應微孔按序編號后分別分別加入100μL氯霉素標準溶液。
5.5.2.在其他的微孔加入100μL已完成前處理的樣品溶液。
5.5.3.再于每一微孔另加入50μL已*回溫的酶標記物。
5.5.4.輕敲酶標板四周，使其充分混合后于室溫下避光靜置1小時。
5.5.5.將微孔中的反應液甩掉，再將已稀釋清洗液加滿每一微孔后甩掉，重復3次。
5.5.6.zui后一次甩掉清洗液后，在吸水紙上拍干。
5.5.7.于每一微孔加入顯色液100μL后，輕敲酶標板四周，使其充分混合。
5.5.8.于室溫下避光靜置20分鐘。
5.5.9.加入反應終止液，每一微孔加入100μL。
5.5.10.酶標儀以單波長450nm或雙波長450nm/650nm讀值。
水產品中氯霉素的測定
5.6.結果判定
5.6.1.定性判定
用樣品的平均吸光度值與標準值比較即可得出樣本所含氯霉素濃度范圍(ng/ml)。假設樣品1的吸光度值為0.313，樣品2的吸光度值為1.032，標準液吸光度值分別是:0ppb為1.892；0.025ppb為1.501；0.05ppb為1.175；0.1ppb為0.751；0.3ppb為0.421；0.6ppb為0.198。則樣品1的濃度范圍0.3ppb-0.6ppb;樣品2的濃度范圍0.05ppb-0.lppb。(再乘以相應的稀釋倍數)
5.6.2.定量判定 所獲得的每個濃度標準溶液和樣本吸光度值的平均值(B)除以*個標準(0標準)的吸光度值(BO)再乘以100%，即百分吸光度值。 百分吸光度值 % =B B0×100% B—標準溶液或樣本溶液的平均吸光度值。 BO—0ng/ml標準溶液的平均吸光度值。 以標準品百分吸光率為縱坐標，以氯霉素標準品濃度(ng/ml)的半對數為橫坐標，繪制標準曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標準曲線中，從標準曲線上讀出樣本所對應的濃度，乘以其對應的稀釋倍數即為樣本中氯霉素的實際濃度。 若利用試劑盒專業分析軟件進行計算，更便于大量樣品的準確、快速分析。
6.檢測方法靈敏度、準確度、精密度
6.1.靈敏度 本方法在魚、蝦、蟹樣品中氯霉素的檢出限為0.025ppb。
6.2.準確度 本方法的回收率為70％～130％。
6.3.精密度 本方法樣本的變異系數小于10％。
7.相關文件 氯霉素酶聯免疫檢測試劑盒說明書（深圳市芬析儀器制造有限公司） 酶標儀操作規程 旋轉蒸發儀操作規程 勻漿器操作規程 振蕩器操作規程 冷凍離心機操作規程 氮吹儀操作規程 天平稱量操作規程。
8.注意事項
1) 使用前請先將試劑盒回溫至室溫(置于室溫60分鐘以上)，各溶液皆搖勻后方可使用。
2) 回溫后，取出所需酶標板條，將剩余未測的ELISA孔條立即放回鋁箔袋中，置于4℃保存。
3) 10倍樣品稀釋液與10倍清洗液請用蒸餾水稀釋10倍方可使用。(如1mL濃縮稀釋液加9mL 蒸餾水)稀釋后的1×萃取稀釋液和1×清洗液可于4℃保存一周。
4) 萃取流程請使用P.P.材質的15mL離心管以免腐蝕。
5) 反應終止液含0.5 N HCl，請小心操作。
6) 氯霉素標準溶液含氯霉索，請小心操作。
7) 本試劑盒的所有試劑出廠前均做過完整的測試，請使用試劑盒提供的藥品及試劑，勿任意更 換。
8) ELISA所得的氯霉索濃度若低于該樣品檢品敏感度即可視為該樣品背景值，無須回乘稀釋倍 數。
反之若所得的氯霉索濃度若高于該樣品檢品敏感度，即可能為氯霉索陽性樣品，建議使用其它檢測方法檢測，如GC/MS等。
水產品中氯霉素殘留測定儀儀器簡介：
CSY-E96S水產品中氯霉素殘留測定儀采用固相酶聯免疫吸附ELISA的原理,即酶聯免疫法；水產品藥物殘留檢測儀可定量快速檢測阿莫西林、孔雀石綠、磺胺類(總量)、重金屬、恩諾沙星、環丙沙星、 紅霉素、氯霉素、土霉素、四環素、 磺胺類(總量)、喹乙醇、已烯雌酚等有毒有害物質及抗生素殘留檢測。并且可以連接食品安全監控系統。
水產品中氯霉素殘留測定儀技術參數：
☆波長范圍:300nm-1000nm
☆波長準確度:±2nm
☆吸光度范圍: 0.000~4.000ABS
☆分辨率 :0.001Abs
☆穩定性 : ±0.001A/hr
☆透射比重復性: ≤0.5%T
☆光源 : 進口LED
☆樣品池 : 微孔板