動物性食品中的氯霉素殘留測定

    酶標板的唯恐包被有偶聯抗原，當加入標準品貨待測樣品。再加入氯霉素抗體時，包被抗原與加入的標準品貨待測樣品競爭抗體，加入酶標記物，酶標記物與抗體結合。通過洗滌除去游離的抗原、抗體及抗原-抗體復合物。加入底物液，底物被結合到酶標板上的酶標記物催化而顯色，在45nm處測量吸光度值，與標準曲線與定量。在整個反應過程中，樣品中氯霉素含量越高，反應顯色就越濃，即氯霉素含量與吸光度值成反比。

儀器與試劑

儀器：

酶標儀；旋轉蒸發儀；組織勻漿器；冷凍離心機；振蕩器；氮吹儀。

試劑：所用試劑均為分析純；水位符合國標規定的二級水

乙酸乙酯、正乙烷、氯霉素ELISA試劑盒 2-8℃冰箱中保存。

實驗步驟：

樣品的提取；將蝦肉勻漿，4℃冷藏備用。；稱取制備好的對蝦樣品（3±0.03）g，置50ml離心管中，加入乙酸乙酯6ml振蕩10min，室溫3800r/min。吸取上層液4ml（約相當于2g樣本），50℃下氮氣吹干，加入正乙烷1ml溶解殘留物，再加緩沖液工作液1ml強烈振蕩1min，再次離心15min，取50ul用于分析。稀釋倍數為0.5倍。做空白對照。

試劑準備工作：從4℃冷藏環境中去除所需試劑，置室溫（20-25℃）平衡30min以上，每種液體試劑使用前均搖勻，。

洗滌液工作也 將濃縮洗滌液（20倍濃縮）40ml用水稀釋至800ml備用。

緩沖液工作液 將濃縮緩沖液（2倍濃縮）50ml用水稀釋至100ml備用。

氯霉素抗體工作液 用緩沖液工作液按1:10的比例稀釋氯霉素抗體濃縮液（如400ul濃縮液+4ml的緩沖液工作液，足夠4個唯恐板條32孔用）

測定： 

將鋁箔袋沿著外延剪開，去除需要數量的微孔板及框架，平衡至室溫。將樣品和標準品對應為空按序編號，每個樣品和標準品做2孔平行，并記錄標準孔和楊平孔所在的位置

加入標準品或處理好的試樣50ul到各自的為空中，然后加入氯霉素抗體工作液50ul，蓋板，輕輕振蕩混勻，室溫環境中反應1h。取出酶標板，將孔內液體甩干，于每孔中加入洗滌液工作液250ul，洗滌4-5次，用洗水紙排干。

每孔中計入酶標記物100ul，蓋板，室溫環境中反應30min。取出酶標板，將孔內液體甩干，每個為空中加入洗滌液工作液250ul，洗滌4-5次，用西都會紙拍干。

加入底物液A液50ul和底物液B液50ul到微孔中，輕輕振蕩混勻，室溫環境中避光顯色30min

加入終止液50ul到為空中，輕輕振蕩混勻，設定酶標儀于450nm處，測定每孔吸光度值。

結果計算

定性測定 示例：以0.45ug/l標準液的吸光度值為判斷標準，樣品吸光度值大于或等于該值為檢出，小于該值為可疑，建議用確定法確證。

定量測定  按一下公式計算吸光度值

相對吸光度值=B/B0*100%