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青島捷世康生物科技有限公司
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蘇木素伊紅(HE)染色液套裝(含分化液)說明書

時(shí)間:2025/2/14閱讀:374
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產(chǎn)品簡(jiǎn)介:

蘇木素伊紅(HE)染色液套裝(含分化液)中蘇木素染色液采用 自主研發(fā)的配方,由進(jìn)口的高純度蘇木精、氧化劑等組成,不含甲醇等有害物質(zhì),對(duì)細(xì)胞核染色效果好,其特點(diǎn)是不易產(chǎn)生沉淀和金屬膜;應(yīng)用范圍廣,可以用于人、動(dòng)物、畜牧、 水產(chǎn)等領(lǐng)域,可以用于組織石蠟切片、冰凍切片和組織細(xì)胞的染色等。蘇木素染色液和伊紅染色液均可以重復(fù)使用。該產(chǎn)品僅用于科研領(lǐng)域,不宜用于臨床診斷或其他用途。

染色原理:
1、細(xì)胞核染色原理:蘇木素為堿性天然染料,可使細(xì)胞核著色,細(xì)胞核內(nèi)染色質(zhì)的成分主 要是 DNA,在 DNA 雙螺旋結(jié)構(gòu)中兩條核苷酸鏈上的磷酸基向外,使 DNA 雙螺旋的外側(cè)帶負(fù)電荷,呈酸性,很容易與帶正電荷的蘇木素堿性染料以離子鍵或氫鍵結(jié)合而被染色。蘇 木素在堿性溶液中呈藍(lán)色,所以細(xì)胞核被染成藍(lán)色。
2、細(xì)胞漿染色原理:伊紅是一種化學(xué)合成的酸性染料,在一定條件下可使細(xì)胞漿著色,細(xì) 胞漿的主要成分是蛋白質(zhì),為兩性化合物,細(xì)胞漿的染色與染液的 pH 值密切相關(guān),當(dāng)染色液 pH 值在胞漿蛋白質(zhì)等電點(diǎn)(4.7~5.0)以下時(shí),胞漿蛋白質(zhì)以堿式電離,則細(xì)胞漿帶正電荷,就可被帶負(fù)電荷的酸性染料染色。伊紅在水中離解成帶負(fù)電荷的陰離子,與胞漿蛋白質(zhì) 帶正電荷的陽離子結(jié)合,使細(xì)胞漿著色,呈現(xiàn)紅色。
3、分化作用:染色后,用某些特定的溶液將組織過多結(jié)合的染色劑脫去,這個(gè)過程稱為分 化作用,所用的溶液稱為分化液。在 HE 染色中常用 0.5-1%鹽酸乙醇作為分化液,因酸能破壞蘇木素的醌型結(jié)構(gòu),使組織與色素分離而退色。大多數(shù)組織經(jīng)蘇木素染色后,必須用鹽 酸乙醇分化,使細(xì)胞核過多結(jié)合的蘇木素染料和細(xì)胞漿吸附的蘇木素染料脫去,再進(jìn)行伊紅 染色,才能保證細(xì)胞核與細(xì)胞漿染色的分明。
4、返藍(lán)作用:分化之后,蘇木素在酸性條件下處于紅色離子狀態(tài),呈紅色;在堿性條件下處于藍(lán)色離子狀態(tài),呈藍(lán)色。組織切片經(jīng)酸性乙醇分化后呈紅色或粉紅色,立即用水除

去組織切片上的酸而中止分化,再用弱堿性水使蘇木素染上的細(xì)胞核呈現(xiàn)藍(lán)色,這個(gè)過程稱為返藍(lán)作用或藍(lán)化作用,另外用自來水(尤其是溫水)浸洗也可使細(xì)胞核返藍(lán),但所需時(shí)間較長(zhǎng)。

自備材料:

1、二甲苯或浸蠟脫蠟透明液、系列乙醇、返藍(lán)液、自來水或蒸餾水

2、乙醇混合固定液、4%多聚甲醛、中性樹膠或環(huán)保封片膠

操作步驟(僅供參考):
(一)石蠟切片染色

1、切片脫蠟至水
①二甲苯或浸蠟脫蠟透明液(DZ2011)作用 2 次,每次 5~10min。
②(可選)無水乙醇作用 2 次,每次 3~5min。
③95%乙醇                                    3~5min
④90%乙醇                                    3~5min
⑤80%乙醇                                    3~5min
⑥自來水或蒸餾水(亦可用 30~40℃溫水)沖洗     1~3min
2、染色
①蘇木素染色液染色                           3~8min
②自來水或蒸餾水沖洗                         5~10s
③酸性乙醇分化                               2~5s
④自來水沖洗                                 20~30s
⑤返藍(lán)液或溫水返藍(lán)                           20~40s
⑥自來水沖洗                                 30~60s
⑦伊紅染色液(水溶)染色                       20~60s
⑧自來水沖洗                                 30~60s

3、脫水、透明、封固

①80%乙醇                         10~20s

②90%乙醇                         10~20s

③95%乙醇作用 2 次,每次 1~2min。

④無水乙醇作用 2 次,每次 2~3min。

⑤二甲苯或浸蠟脫蠟透明液(DZ2011)透明 3 次,每次 2~3min。

⑥中性樹膠封片。

(二)冰凍切片染色

1、-乙醇混合固定液      5~10s

2、自來水沖洗               2~5s

3、蘇木素染色液滴染 1~5min(可加熱至 50℃)。

4、自來水沖洗               2~5s

5、酸性乙醇分化             2~5s

6、自來水沖洗               2~5s

7、返藍(lán)液或溫水返藍(lán)         2~5s

8、自來水沖洗               5~10s

9、伊紅染色液(水溶)染色     2~20s

10、自來水沖洗              5~10s

11、80%乙醇                 1~2s

12、95%乙醇                 1~2s

13、無水乙醇                2~5s

14、苯酚二甲苯(1:3)         2~5s

15、二甲苯或浸蠟脫蠟透明液(DZ2011)透明 3 次,每次 2~5s。

16、中性樹膠封片。

染色結(jié)果:

細(xì)胞核呈藍(lán)色;細(xì)胞質(zhì)、肌纖維、膠原纖維、甲狀腺膠質(zhì)等呈深淺不一的紅色;角蛋白、紅細(xì)胞等呈明亮的橙紅色。

注意事項(xiàng):

1、切片脫蠟應(yīng)盡量干凈;溫度低時(shí),可在恒溫箱 60~70℃處理。

2、系列乙醇應(yīng)經(jīng)常更換新液。

3、酸性乙醇分化時(shí)間應(yīng)根據(jù)切片厚薄、組織類別以及新舊而定,另外分化后自來水沖洗時(shí)間應(yīng)該足夠,以便清洗酸。

4、-乙醇混合固定液是由和95%乙醇等量混合而得,再加入適量乙酸,密閉保存。

5、冷凍切片染色時(shí)間盡量要短。

6、返藍(lán)液常使用0.2~1%氨水或 Scott促藍(lán)液或0.1~1%碳酸溶液代替。

7、為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

 

有效期:12 個(gè)月有效。常溫運(yùn)輸和保存。

 



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